目的探討含RGD肽的類彈性蛋白多肽RGD-ELPs和RDG-ELPs與細(xì)胞相容性及兩種融合蛋白對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）黏附的影響.方法應(yīng)用大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)RGDELPs和RDG-ELPs蛋白,利用可逆相變循環(huán)（ITC）純化兩種融合蛋白;通過MTT法及活/死細(xì)胞染色法檢測兩種融合蛋白與人胚腎細(xì)胞（HEK293T）的相容性;通過貼壁細(xì)胞計(jì)數(shù)方法檢測不同濃度RGD-ELP對體外HUVECs細(xì)胞黏附表達(dá)的影響.結(jié)果利用BL21（DE3）大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)制備高濃度的RGD-ELPs和RDGELPs,通過ITC純化得到了高純度融合蛋白; MTT法及活/死細(xì)胞染色法結(jié)果提示RGD-ELPs和RDG-ELPs蛋白具有良好的相容性;細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:RGD-ELPs濃度越大,HUVEC細(xì)胞黏附能力越強(qiáng),而對照組RDGELPs則未顯示出明顯的細(xì)胞黏附效果.結(jié)論成功表達(dá)并純化了RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白;兩種蛋白均具有良好的細(xì)胞相容性; RGD-ELPs蛋白具有明顯的促進(jìn)HUVECs細(xì)胞黏附作用. 

【文章來源】：北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,21(06)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白的原核表達(dá)

通過ITC方法純化RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白．在4℃條件下，因融合蛋白低于其相變溫度(inverse temperature transition,Tt)，具有較高溶解度，分布于上清液中;當(dāng)溫度升高至37℃時(shí)，蛋白由于高于相變溫度而發(fā)生相轉(zhuǎn)變，以聚集體形式存在，目的蛋白從上清液中析出，通過離心收集沉淀復(fù)溶即可得到目的蛋白．純化結(jié)果見圖2．在預(yù)計(jì)分子量大小附近出現(xiàn)比較明顯的蛋白條帶，盡管在目的蛋白上方有少量雜蛋白條帶，但目的蛋白仍然顯示出較高的蛋白純度．2.3 細(xì)胞相容性分析

利用MTT法檢測不同濃度的RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白對HEK293T細(xì)胞增殖能力的影響．結(jié)果見圖3．加入蛋白后培養(yǎng)48 h，不同濃度的RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白處理組生長良好，在蛋白濃度為200μg/m L時(shí)細(xì)胞存活率仍接近100%，說明兩種蛋白具有良好的細(xì)胞相容性．活/死細(xì)胞染色也可用于評估材料與細(xì)胞的相容性，結(jié)果顯示:與不加蛋白溶液的對照組比較，RGD-ELPs和RDG-ELPs處理組絕大多數(shù)為明亮的綠色細(xì)胞(活細(xì)胞)，細(xì)胞輪廓邊界清晰，盡管視野中有少數(shù)紅色細(xì)胞(死細(xì)胞)，推測可能是由于細(xì)胞匯合度過高而造成的，進(jìn)一步提示兩種融合蛋白具有良好相容性．2.4 細(xì)胞黏附表達(dá)結(jié)果分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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