目的:脂滴快速融合是增大脂滴直徑的方式之一,但其研究相對(duì)少。本研究旨在建立脂滴快速融合的細(xì)胞模型,以便對(duì)其進(jìn)行深入的生物學(xué)研究。方法:本研究使用大鼠腎成纖維細(xì)胞系NRK和小鼠前脂肪細(xì)胞系3T3-L1兩種細(xì)胞系,先用油酸誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量脂滴,再使用饑餓緩沖液培養(yǎng)細(xì)胞,利用顯微鏡實(shí)時(shí)觀測(cè)技術(shù)跟蹤脂滴動(dòng)態(tài)變化,建立脂滴快速融合的模型。而后在此模型中,加入自噬抑制劑或者以過(guò)表達(dá)CCT為陽(yáng)性對(duì)照,過(guò)表達(dá)PAT蛋白（PLIN1、ADRP和TIP47）,來(lái)探究它們?cè)谡{(diào)控脂滴快速融合方面的功能。結(jié)果:饑餓緩沖液處理約3小時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生脂滴快速融合,其融合速率很快,從脂滴接觸到融合完成可發(fā)生在20秒內(nèi),顯然不同于CIDE蛋白調(diào)控的緩慢脂滴融合過(guò)程。自噬抑制劑可以抑制自噬,但是并沒(méi)有顯著影響脂滴快速融合,說(shuō)明饑餓誘導(dǎo)的脂滴快速融合不依賴(lài)于自噬。另發(fā)現(xiàn),與過(guò)表達(dá)GFP相比,過(guò)表達(dá)定位于脂滴的GFP-CCT、GFP-PLIN1、GFP-ADRP或GFP-TIP47均能顯著性抑制快速融合導(dǎo)致的脂滴變大的現(xiàn)象。結(jié)論:本研究建立了饑餓緩沖液誘導(dǎo)脂滴發(fā)生快速融合的細(xì)胞模型,并證明PAT蛋白（PLIN1、ADRP、... 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,20(04)

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

饑餓處理誘導(dǎo)NRK細(xì)胞發(fā)生脂滴快速融合

在正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基（DMEM+10%FBS）培養(yǎng)細(xì)胞的情況下，3T3-L1細(xì)胞中脂滴較小且少，不便于觀察脂滴形態(tài)。于是本研究在3T3-L1細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加200μM OA，并維持16小時(shí)，誘導(dǎo)脂滴的積累。進(jìn)一步，使用饑餓緩沖液處理細(xì)胞，相較于未饑餓處理的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)饑餓處理后的細(xì)胞內(nèi)的脂滴直徑明顯增大（圖1）。2.2 NRK細(xì)胞發(fā)生脂滴快速融合現(xiàn)象

進(jìn)一步，我們檢測(cè)了過(guò)表達(dá)PAT脂滴蛋白是否影響細(xì)胞自噬水平。與表達(dá)GFP細(xì)胞相比，表達(dá)GFP-CCT、GFP-PLIN1、GFP-ADRP以及GFP-TIP47的NRK細(xì)胞，在經(jīng)歷饑餓處理后表現(xiàn)為相對(duì)一致的自噬水平：p62蛋白減少；LC3剪切增加（圖4A）。表明饑餓誘導(dǎo)了自噬的發(fā)生，不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞之間自噬水平?jīng)]有顯著性差異。同時(shí)，我們也在穩(wěn)轉(zhuǎn)GFP-LC3的NRK細(xì)胞中過(guò)表達(dá)脂滴定位蛋白CCT和PAT蛋白（PLIN1、ADRP）。同樣地發(fā)現(xiàn)，由饑餓緩沖液誘導(dǎo)產(chǎn)生的脂滴增大現(xiàn)象被抑制，NRK-GFP-LC3細(xì)胞系的結(jié)果與前面NRK細(xì)胞系的結(jié)果一致。


本文編號(hào)：3063049