關(guān)節(jié)軟骨是一種覆蓋于關(guān)節(jié)表面、結(jié)構(gòu)特殊的結(jié)締組織,主要由軟骨基質(zhì)和軟骨細(xì)胞構(gòu)成,沒(méi)有血管和神經(jīng)分布,一旦發(fā)生損傷難以自我再生修復(fù)。近年來(lái),干細(xì)胞治療在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展為軟骨再生提供了新的希望。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ASCs）因具有來(lái)源豐富、低侵入性、易于獲取和多向分化潛能等優(yōu)勢(shì),廣泛應(yīng)用于再生研究。然而,體外培養(yǎng)擴(kuò)增過(guò)程會(huì)引起細(xì)胞衰老并降低ASCs的分化潛能,同時(shí)傳統(tǒng)的酶消化法會(huì)破壞ASCs表面結(jié)構(gòu),影響細(xì)胞活性,外源性膠原酶還存在傳播疾病的可能。因此,我們通過(guò)純物理的機(jī)械方法處理脂肪組織,旨在獲得內(nèi)含豐富高活性ASCs的天然支架,用于體內(nèi)軟骨缺損的修復(fù)并評(píng)估其再生療效。Lipogems?是一種新型的、封閉的設(shè)備,可以利用磁珠震蕩乳化脂肪組織、減小脂肪簇的粒徑并除去殘留的致炎性油脂和血液,以獲得微片段化脂肪組織（MFAT）。通過(guò)細(xì)胞流式分選技術(shù)確定MFAT來(lái)源細(xì)胞主要為ASCs,并在體外進(jìn)行三系誘導(dǎo)分化驗(yàn)證其具有多向分化潛能。通過(guò)體外的劃痕實(shí)驗(yàn)和遷移實(shí)驗(yàn)研究MFAT對(duì)軟骨細(xì)胞遷移的影響。最后在體內(nèi)確定MFAT是否可以通過(guò)脂肪組織結(jié)構(gòu)的天然支架,ASCs細(xì)胞成分和分泌的細(xì)胞因子和趨化因子等... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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微片段化脂肪組織處理獲取的過(guò)程

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文結(jié)果173.1微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞的表征與鑒定微片段化脂肪組織于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)7-21天后，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈短梭形，同時(shí)有部分漂浮物和脂滴存在（圖2-A）。待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%后傳代，傳代后細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，集落狀生長(zhǎng)，分布均勻，形態(tài)一致，增殖迅速，與典型的間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)一致，一般3天可長(zhǎng)滿（圖2-B、C）。圖2.微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)和誘導(dǎo)分化結(jié)果。A.原代細(xì)胞（40×）；B.第1代細(xì)胞（40×）；C.第2代細(xì)胞（40×）;D.油紅O染色；E.茜素紅染色；F.阿利新藍(lán)染色。標(biāo)尺：200μm。微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞在成脂誘導(dǎo)分化條件下培養(yǎng)21天后進(jìn)行油紅O染色，顯微鏡下可觀察到明顯的脂滴形成，對(duì)照組未見明顯的脂滴（圖3-A）。微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)分化條件下培養(yǎng)21天后進(jìn)行茜素紅染色，顯微鏡下可觀察到明顯的鈣結(jié)節(jié)形成，對(duì)照組未見

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文結(jié)果18明顯的鈣結(jié)節(jié)（圖3-B）。微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞在成軟骨誘導(dǎo)分化條件下培養(yǎng)21天后進(jìn)行阿利新藍(lán)染色，顯微鏡下可觀察到軟骨微球切片組織被染為藍(lán)色，呈陽(yáng)性反應(yīng)（圖3-C）。細(xì)胞表面抗原分析結(jié)果表明，微片段化脂肪組織來(lái)源的細(xì)胞表面表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記分子CD29，CD44和CD90，而不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記分子CD31，CD34和CD45（圖3），符合間充質(zhì)干細(xì)胞（ASCs）的表型特征。圖3.微片段化脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞的流式表型鑒定結(jié)果。陽(yáng)性表達(dá)CD29，CD44和CD90等間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記分子，陰性表達(dá)CD31，CD34和CD45等造血干細(xì)胞標(biāo)記分子。


本文編號(hào)：3062612