本文關(guān)鍵詞：脫細胞氣管基質(zhì)材料生物相容性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：氣管由于外傷、腫瘤及先天性疾病造成的長段氣管缺損在臨床上較為常見,須通過合適的氣管替代物進行修復重建。組織工程技術(shù)為氣管的修復重建提供了新的途徑。脫細胞氣管基質(zhì)材料具有與正常組織相似的組成和結(jié)構(gòu),為組織工程氣管提供了良好的脫細胞氣管基質(zhì)材料。本實驗?zāi)康脑谟谔接懹酶呗人徕c(NaC104)脫細胞方法獲取的脫細胞氣管基質(zhì)材料的生物相容性,在此基礎(chǔ)上還比較該脫細胞氣管基質(zhì)材料及其分別與京尼平、戊二醛交聯(lián)后的生物相容性。方法：1.將體重250±50g的幼年新西蘭兔作為間充質(zhì)干細胞(MSCs)的供體,將兔麻醉后從脛骨平臺抽取骨髓,用全血培養(yǎng)法進行體外培養(yǎng)、增殖,并通過貼壁性、多項誘導分化能力進行鑒定。2.將2000±500g的成年新西蘭兔作為氣管的供體,經(jīng)過5%NaClO4脫細胞處理后,進行組織學HE染色、DAPI染色、掃描電鏡觀察。3.將脫細胞氣管基質(zhì)材料縱向剖開并平均分成0.5*0.5cm小方塊,隨機分成3組：脫細胞氣管組(A組),脫細胞氣管+1%京尼平組(B組),脫細胞氣管+0.625%戊二醛(C組)。將生長較好的第三代間充質(zhì)干細胞接種到三組脫細胞氣管外壁表面,置于24孔板內(nèi)進行體外培養(yǎng),并通過干細胞接種及細胞活性觀察、浸提液細胞毒性試驗、掃描電鏡觀察評估細胞外基質(zhì)的生物相容性。結(jié)果：1.MSCs培養(yǎng)及鑒定MSCs具有貼壁性,成簇生長,形態(tài)不一,多呈梭形、多角形。MSCs具有多向分化潛能,能被誘導成脂肪細胞及軟骨細胞。2.脫細胞氣管基質(zhì)的鑒定HE染色顯示氣管上皮細胞已去除,粘膜層的基底層、粘膜下層和氣管軟骨組織的微觀結(jié)構(gòu)基本保留完整,外壁結(jié)構(gòu)疏松。DAPI染色顯示上皮細胞核、粘膜下層細胞核明顯減少,軟骨細胞核保留活性,染色顯示藍色熒光。電子顯微鏡下示氣管上皮完全去除,基底膜結(jié)構(gòu)完整。3.干細胞接種及細胞活性鑒定A、B組材料安全性較好,周圍的細胞貼壁生長,未見懸浮細胞。C組材料安全性差,周圍見死亡細胞懸浮。4.浸提液細胞毒性檢測A和B組浸提液能促進細胞增殖,B組促進細胞增殖效果優(yōu)于A組。C組浸提液有毒性,細胞死亡。5.掃描電子顯微鏡A組組織材料的生物相容性好,細胞在氣管基質(zhì)材料外壁上貼附良好,形成單層片狀,覆蓋氣管基質(zhì)材料外壁間隙,局部可見料暴露區(qū)域；B組組織材料的生物相容性最好,氣管基質(zhì)材料外壁間隙基本被細胞填充、覆蓋；C組脫細胞氣管基質(zhì)材料外壁僅局部可見細胞填充、覆蓋。結(jié)論：1.MSCs具有多向分化潛能,是組織工程氣管的構(gòu)建良好的種子來源。2.5%NaClO4脫細胞處理獲取的氣管基質(zhì)材料具有良好生物相容性,能支持種子細胞粘附和生長。3.京尼平作為一種天然蛋白交聯(lián)劑,能有效提高脫細胞氣管基質(zhì)材料的生物相容性。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細胞 組織工程氣管 生物相容性 京尼平
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 符號說明9-10
• 引言10-11
• 一、實驗設(shè)計11
• 1 實驗動物11
• 2 實驗內(nèi)容11
• 二、實驗材料11-14
• 1 主要試劑11-12
• 2 實驗用試劑配制12-13
• 3 實驗儀器13
• 4 實驗耗材13-14
• 三、實驗方法14-17
• 1 MSCs的獲取、培養(yǎng)及鑒定14-15
• 1.1 細胞原代培養(yǎng)14
• 1.2 細胞傳代14
• 1.3 細胞鑒定14-15
• 2 脫細胞氣管基質(zhì)的獲取及檢測15-16
• 2.1 氣管的獲取15
• 2.2 脫細胞氣管基質(zhì)的制備15
• 2.3 脫細胞氣管基質(zhì)的檢測15-16
• 3 細胞/脫細胞氣管基質(zhì)復合材料的制備及體外檢測16-17
• 3.1 細胞/脫細胞氣管基質(zhì)復合材料的制備16
• 3.2 細胞/脫細胞氣管基質(zhì)復合材料的體外檢測16-17
• 四、實驗結(jié)果17-19
• 1 MSCs的鑒定17-18
• 1.1 鏡下觀察17
• 1.2 成脂誘導17-18
• 1.3 成骨誘導18
• 2 脫細胞氣管基質(zhì)的檢測18
• 2.1 HE染色18
• 2.2 DAPI染色18
• 2.3 掃描電子顯微鏡18
• 3 細胞/脫細胞氣管基質(zhì)復合材料的體外檢測18-19
• 3.1 MSCs接種及細胞活性18
• 3.2 浸提液細胞毒性檢測18-19
• 3.3 掃描電子顯微鏡19
• 五、討論19-22
• 參考文獻22-25
• 結(jié)論25-26
• 附圖26-34
• 綜述34-42
• 參考文獻39-42
• 致謝42-43
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄43-44

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