Semaphorin 3A殼聚糖微球-絲素基α磷酸三鈣骨水泥細胞毒性及成骨性能研究
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【摘要】:目的:制備復(fù)合Semaphorin 3A殼聚糖微球-絲素基α-磷酸三鈣骨水泥(Semaphorin3A Chitosan Microspheres/Silk Fibroin/α-Tricalcium,Sema3A CMs/SF/α-TCP),并對該材料進行細胞毒性及體外成骨性能評估。方法:1.通過將家蠶生絲脫膠、溶解、透析、濃縮四個步驟制備絲素溶液,使用乳化交聯(lián)法制備微米級殼聚糖微球,使用膨脹吸附法制備Sema3A載藥殼聚糖微球,使用液-固法制備Sema3A CMs/SF/α-TCP,同時制備CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP。2.使用Sema3A ELISA試劑盒對CM的載藥情況和Sema3A CMs/SF/α-TCP的藥物釋放性能進行檢測。3.制備材料浸提液,使用浸提液培養(yǎng)MC3T3-E1細胞系,設(shè)定陰性對照組和陽性對照組,通過MTT法及培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性測定檢測材料的細胞毒性。4.將MC3T3-E1細胞分別種植于Sema3A CMs/SF/α-TCP、CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP材料表面,使用掃描電鏡觀察Sema3A CMs/SF/α-TCP材料表面的細胞形態(tài),分別檢測其細胞培養(yǎng)液中的堿性磷酸酶(Alkline Phosphatase,ALP)活性,并通過RT-q PCR,檢測其成骨相關(guān)基因Runx2、Col-1及ALP的表達情況。結(jié)果:1.使用乳化交聯(lián)法成功制備出微米級殼聚糖微球,微球形態(tài)規(guī)則,分散良好。微球載藥率為0.41μg/mg,Sema3A CMs/SF/α-TCP材料可持續(xù)釋放Sema3A達30天,第30天的釋放率為91.73%。2.Sema3A CMs/SF/α-TCP材料的細胞毒性為0級或1級。3.MC3T3-E1細胞系在材料表面形態(tài)良好,能夠伸出偽足貼附于材料表面。4.Sema3A CMs/SF/α-TCP組的細胞培養(yǎng)液ALP活性在培養(yǎng)后的第14天和第21天高于其他分組,其中14天時間點各組ALP活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),21天時間點的ALP活性差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.在培養(yǎng)后的14天,Sema3A CMs/SF/α-TCP組中的成骨相關(guān)基因表達高于其他實驗分組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:復(fù)合Sema3A CMs/SF/α-TCP材料能夠有效負載Sema3A并緩慢釋放Sema3A,支持MC3T3-E1細胞系貼附、生長,無細胞毒性,并且可促進成骨相關(guān)基因的表達,提高ALP活性,具有一定的促進新骨生成能力。
【關(guān)鍵詞】:α-磷酸三鈣 絲素 殼聚糖微球 Semaphorin 3A蛋白 細胞毒性 骨誘導(dǎo)性
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R318.08
【目錄】:
- 中文摘要5-7
- Abstract7-10
- 引言10-12
- 材料與方法12-20
- 結(jié)果20-26
- 討論26-32
- 結(jié)論32-33
- 參考文獻33-40
- 綜述40-53
- 參考文獻47-53
- 論文發(fā)表53-54
- 英文縮略詞表54-55
- 致謝55-57
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本文關(guān)鍵詞:Semaphorin 3A殼聚糖微球-絲素基α磷酸三鈣骨水泥細胞毒性及成骨性能研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
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