本文關(guān)鍵詞：氯化鑭在磨損顆粒誘導(dǎo)無(wú)菌性炎癥中作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度和劑量的氯化鑭對(duì)人工關(guān)節(jié)磨損顆粒刺激無(wú)菌性炎癥反應(yīng)的作用效果，為進(jìn)一步觀察氯化鑭對(duì)磨損顆粒導(dǎo)致炎性骨溶解的作用效果及進(jìn)一步研究其作用機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法：采用真空球磨法體外制備人工關(guān)節(jié)磨損顆粒。體外實(shí)驗(yàn)中，RAW264.7細(xì)胞被隨機(jī)分成8組：空白對(duì)照組、磨損顆粒組、磨損顆粒+氯化鑭組(2.5μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)和氯化鑭組(2.5μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)；分組處理48h后采用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)分別進(jìn)行細(xì)胞活性和凋亡檢測(cè)，并用ELISA、RT-PCR和western blot檢測(cè)TNF-α、IL-1β和NF-κB基因及蛋白的表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，采用45只雄性BALB/c小鼠建立氣囊模型，，并隨機(jī)分為空白對(duì)照組、磨損顆粒組和磨損顆粒+氯化鑭組(0.1μmol、0.9μmol和8.1μmol)；分組處理后第7天處死小鼠并收集囊壁組織，通過(guò)HE染色觀察囊壁組織中炎癥反應(yīng)情況，并采用ELISA、RT-PCR和western blot在基因及蛋白水平檢測(cè)囊壁組織中TNF-α、IL-1β和NF-κ B的表達(dá)變化。 結(jié)果：分組處理期間，三種濃度和劑量的氯化鑭均未影響RAW264.7細(xì)胞的活性和小鼠的存活。磨損顆粒在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均可有效刺激無(wú)菌性炎癥的產(chǎn)生。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示2.5和10μmol/L氯化鑭可顯著抑制TNF-α、IL-1β以及NF-κB的表達(dá)（P0.05），但100μmol/L氯化鑭未見(jiàn)明顯的炎癥抑制作用，甚至促進(jìn)炎癥的產(chǎn)生。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示0.9μmol氯化鑭能抑制小鼠氣囊模型中磨損顆粒誘導(dǎo)的促炎癥因子及NF-κ B基因和蛋白的表達(dá)（P0.05）；0.1μmol和8.1μmol氯化鑭未見(jiàn)明顯炎癥抑制效果，8.1μmol氯化鑭甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中氯化鑭未對(duì)RAW264.7細(xì)胞和BALB/c小鼠產(chǎn)生毒性作用；一定濃度和劑量的氯化鑭可抑制體內(nèi)外磨損顆粒刺激產(chǎn)生的無(wú)菌性炎癥，其作用機(jī)制可能與抑制NF-κB活化有關(guān)；氯化鑭的抑制效果成濃度和劑量相關(guān)性，過(guò)高濃度和劑量的氯化鑭不但不能產(chǎn)生抑制無(wú)菌性炎癥的作用，甚至有促進(jìn)炎癥產(chǎn)生和發(fā)生其他不良反應(yīng)的趨勢(shì)。
【關(guān)鍵詞】：氯化鑭 磨損顆粒 無(wú)菌性炎癥 促炎癥因子 NF-κB RAW264.7細(xì)胞 小鼠氣囊模型
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料與方法11-24
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 RAW264.7 細(xì)胞株和 BALB/c 小鼠來(lái)源11
• 2.1.2 主要儀器與設(shè)備11-12
• 2.1.3 主要試劑12-13
• 2.2 方法13-23
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料滅菌和去熱原13
• 2.2.2 磨損顆粒的制備與分析13-14
• 2.2.3 體外 RAW264.7 細(xì)胞的培養(yǎng)和分組14
• 2.2.4 體內(nèi)小鼠氣囊（air-pouch）模型建立及分組14-15
• 2.2.5 細(xì)胞 CCK-8 實(shí)驗(yàn)15-16
• 2.2.6 ANNEXIN V-FITC/PI 流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)16
• 2.2.7 小鼠大體觀察及組織 HE 染色16-17
• 2.2.8 ELISA 法檢測(cè)細(xì)胞和組織中 TNF-α、IL-1β的釋放17-18
• 2.2.9 RT-PCR 檢測(cè)細(xì)胞和組織中 TNF-α、IL-1β和 NFATc1 基因的表達(dá)18-21
• 2.2.10 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞和組織中 NF-κB/p65 的表達(dá)21-23
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 第3章 結(jié)果24-39
• 3.1 體外實(shí)驗(yàn)24-31
• 3.1.1 氯化鑭對(duì)磨損顆粒干預(yù)的 RAW264.7 細(xì)胞增殖和凋亡的影響24-27
• 3.1.2 氯化鑭對(duì)磨損顆粒刺激的 RAW264.7 細(xì)胞內(nèi) TNF-α、IL-1β和NFATc1 mRNA 表達(dá)的影響27-29
• 3.1.3 氯化鑭對(duì)磨損顆粒刺激的 RAW264.7 細(xì)胞釋放和表達(dá) TNF-α、IL-1β和 NF-κB/p65 蛋白的影響29-31
• 3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)31-39
• 3.2.1 氯化鑭對(duì)磨損顆粒刺激小鼠氣囊模型的影響31-34
• 3.2.2 氯化鑭在小鼠氣囊模型中對(duì)磨損顆粒刺激的 TNF-α、IL-1β和 NFATc1 mRNA 表達(dá)的影響34-36
• 3.2.3 氯化鑭在小鼠氣囊模型中對(duì)磨損顆粒刺激的 TNF-α、IL-1β釋放和NF-κB/p65 表達(dá)的影響36-39
• 第4章 討論39-45
• 4.1 磨損顆粒誘導(dǎo)的無(wú)菌性炎癥與假體松動(dòng)39-40
• 4.2 鑭元素對(duì) RAW264.7 細(xì)胞活性和對(duì) BALB/c 小鼠生存的影響40-41
• 4.3 氯化鑭對(duì)磨損顆粒誘導(dǎo) TNF-α和 IL-1β表達(dá)和釋放的影響41
• 4.4 氯化鑭對(duì)磨損顆粒激活 NF-κB 的影響41-42
• 4.5 氯化鑭在磨損顆粒誘導(dǎo)無(wú)菌性炎癥中的作用特點(diǎn)42-43
• 4.6 展望與小結(jié)43-45
• 第5章 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果53-54
• 綜述54-63
• 參考文獻(xiàn)61-63

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