【目的】腎臟移植是終末期腎病的最佳替代治療手段,受者接受腎移植后需長(zhǎng)期服用免疫抑制劑。移植入無(wú)排異反應(yīng)的人工合成組織工程腎臟可解除長(zhǎng)期服藥痛苦。豬腎因與人腎生理性能相似而倍受期待,但異種細(xì)胞共培養(yǎng)的物種差異還尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究主要目的是灌注制備家豬、新西蘭兔、SD大鼠腎臟去細(xì)胞生物支架,并探究三者腎支架對(duì)異種共培養(yǎng)種子細(xì)胞人胚腎上皮細(xì)胞(HEK)的影響�！痉椒ā拷】党赡昙邑i10頭、新西蘭白兔28只、SD大鼠28只,分別將獲取的腎臟隨機(jī)均等分為正常組和支架組,支架組由腎動(dòng)脈依次灌入肝素、1%Triton X-100和1%SDS溶液完成去細(xì)胞化。兩組腎臟分別作組織形態(tài)學(xué)鑒定并檢測(cè)機(jī)械力學(xué)性質(zhì)。去細(xì)胞支架作組織爬片與人胚腎上皮細(xì)胞共培養(yǎng),觀察細(xì)胞在支架爬片上的生長(zhǎng)狀況,免疫熒光檢測(cè)人胚腎上皮細(xì)胞PCNA及DAPI表達(dá)量,并收集熒光圖片作灰度分析�！窘Y(jié)果】家豬、新西蘭白兔、SD大鼠腎臟經(jīng)灌注去細(xì)胞后HE核染色陰性,Masson染色顯示膠原蛋白陽(yáng)性,Collagen I和Collagen IV熒光染色陽(yáng)性,三種物種腎正常組DNA含量遠(yuǎn)高于支架組DNA含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);電鏡掃描可見(jiàn)去細(xì)胞支架內(nèi)蜂窩狀孔洞結(jié)構(gòu),并可見(jiàn)典型的腎小球龕樣結(jié)構(gòu);支架組腎楊氏模量與正常組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;HEK細(xì)胞熒光染色圖像灰度分析顯示家豬、新西蘭白兔、SD大鼠腎支架組PCNA/DAPI值高于空白對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而三組支架組之間PCNA/DAPI值對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)論】本研究灌注去細(xì)胞方法可去除家豬、新西蘭白兔、SD大鼠腎臟內(nèi)的細(xì)胞及細(xì)胞核,保留細(xì)胞外基質(zhì),維持細(xì)胞外基質(zhì)的三維空間結(jié)構(gòu)和機(jī)械力學(xué)強(qiáng)度,是一種可靠有效的制備家豬、新西蘭白兔、SD大鼠腎臟去細(xì)胞生物支架方法,灌注制備的去細(xì)胞支架均可提高異種共培養(yǎng)人胚腎上皮細(xì)胞HEK的增殖活性,且這種提高作用在家豬、新西蘭白兔和SD大鼠之間并無(wú)物種差異性。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R318
【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文索引
第1章 緒論
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞、生化試劑耗材及儀器設(shè)備
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 動(dòng)物腎臟獲取
        2.3.2 腎臟去細(xì)胞化
        2.3.3 DNA檢測(cè)
        2.3.4 組織學(xué)HE及Masson染色
        2.3.5 免疫熒光染色
        2.3.6 電鏡掃描
        2.3.7 拉伸試驗(yàn)
        2.3.8 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞支架共培養(yǎng)
        2.3.9 細(xì)胞免疫熒光
        2.3.10 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 大體形態(tài)觀測(cè)及組織學(xué)和免疫組織化學(xué)鑒定
    3.2 DNA檢測(cè)
    3.3 掃描電鏡檢測(cè)
    3.4 拉伸試驗(yàn)
    3.5 細(xì)胞支架共培養(yǎng)
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間科研成果
基金
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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