發(fā)布時(shí)間：2020-10-29 16:12

　　 目的:研究肝素-透明質(zhì)酸-肝臟細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠(HP-HA-肝ECM水凝膠)的制備方法及細(xì)胞相容性。方法:切取新鮮大鼠肝臟組織,使用凍融法、TritonX-100洗滌及胃蛋白酶溶解結(jié)合機(jī)械震蕩法進(jìn)行脫細(xì)胞制備,HE染色法及DAPI染色法對(duì)其脫細(xì)胞效果進(jìn)行檢測(cè)。將脫細(xì)胞后的肝臟ECM交聯(lián)肝素-透明質(zhì)酸水凝膠,制備HP-HA-肝ECM水凝膠。利用CCK8法和Live/Dead細(xì)胞染色法進(jìn)行HP-HA-肝ECM水凝膠與下頜下腺細(xì)胞相容性檢測(cè)。結(jié)果:HP-HA-肝ECM水凝膠使下頜下腺細(xì)胞增殖活性升高,死細(xì)胞比率降低。結(jié)論:HP-HA-肝ECM水凝膠支架材料具有良好的細(xì)胞相容性。
【部分圖文】：

圖1肝臟脫細(xì)胞前后的比較(×100)Fig1Comparisonofthelivertissuebeforeandafterdecellulariza-tion(×100)經(jīng)過(guò)脫細(xì)胞化、凍干、冰凍研磨、胃蛋白酶溶解后得到的膠狀肝ECM成分(圖2A)。該成分外觀通透，無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)，無(wú)明顯異味(圖2B)。成品肝素－透明質(zhì)酸水凝膠，初始為均質(zhì)白色固態(tài)，待完全溶解后為透明狀液體。將兩者交聯(lián)得到HP-HA-肝ECM水凝膠，無(wú)色無(wú)味透明狀，稍黏稠，30min完全成為凝膠狀態(tài)(圖2C)，分別包被于96孔板和48孔板中(圖2D～E)。2．3新生SD大鼠下頜下腺細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)第3天可見(jiàn)典型的上皮細(xì)胞貼壁，第4天時(shí)可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞，采用差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞后可得到形態(tài)較為一致的下頜下腺細(xì)胞，第5天時(shí)于顯微鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞呈多角形，邊界清晰，排列呈鵝卵石樣外觀;培養(yǎng)至第14天時(shí)，可見(jiàn)細(xì)胞排列緊密，呈鋪路石狀，胞漿豐富，可見(jiàn)分泌顆粒(圖3)。培養(yǎng)第14天時(shí)第1次傳代。圖2肝ECM成分的獲取及交聯(lián)Fig2Thepreparationofliverdecellularizedextracellularmatrixandcrosslink圖3原代培養(yǎng)的SD大鼠下頜下腺細(xì)胞形態(tài)(A:×200;B:×400)Fig3PrimarylyculturedsubmandibularglandcellsofSDrat(A:×200;B:×400)2．4體外培養(yǎng)SD大鼠下頜下腺細(xì)胞免疫學(xué)鑒定以α-淀粉酶和CK7作為下頜下腺細(xì)胞的標(biāo)記蛋白。α-淀粉酶和CK7陽(yáng)性表達(dá)的表現(xiàn)是下頜下腺細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)呈綠色熒光染色和棕色染色。α-淀粉酶免疫熒光染色和CK7免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果PBS液作為陰性對(duì)照。第2代SD大鼠下頜下腺細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)α-淀粉酶、CK7標(biāo)記蛋白。對(duì)照組結(jié)果陰性(圖4)。圖4SD大鼠下頜下腺細(xì)胞α-淀粉酶和CK7免疫學(xué)鑒定(×400)Fig4Immunologicalidentificationofα-amylaseandCK7inSMGCs(×400)2．5下頜下腺細(xì)胞在HP-HA-肝ECM水

圖1肝臟脫細(xì)胞前后的比較(×100)Fig1Comparisonofthelivertissuebeforeandafterdecellulariza-tion(×100)經(jīng)過(guò)脫細(xì)胞化、凍干、冰凍研磨、胃蛋白酶溶解后得到的膠狀肝ECM成分(圖2A)。該成分外觀通透，無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)，無(wú)明顯異味(圖2B)。成品肝素－透明質(zhì)酸水凝膠，初始為均質(zhì)白色固態(tài)，待完全溶解后為透明狀液體。將兩者交聯(lián)得到HP-HA-肝ECM水凝膠，無(wú)色無(wú)味透明狀，稍黏稠，30min完全成為凝膠狀態(tài)(圖2C)，分別包被于96孔板和48孔板中(圖2D～E)。2．3新生SD大鼠下頜下腺細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)第3天可見(jiàn)典型的上皮細(xì)胞貼壁，第4天時(shí)可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞，采用差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞后可得到形態(tài)較為一致的下頜下腺細(xì)胞，第5天時(shí)于顯微鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞呈多角形，邊界清晰，排列呈鵝卵石樣外觀;培養(yǎng)至第14天時(shí)，可見(jiàn)細(xì)胞排列緊密，呈鋪路石狀，胞漿豐富，可見(jiàn)分泌顆粒(圖3)。培養(yǎng)第14天時(shí)第1次傳代。圖2肝ECM成分的獲取及交聯(lián)Fig2Thepreparationofliverdecellularizedextracellularmatrixandcrosslink圖3原代培養(yǎng)的SD大鼠下頜下腺細(xì)胞形態(tài)(A:×200;B:×400)Fig3PrimarylyculturedsubmandibularglandcellsofSDrat(A:×200;B:×400)2．4體外培養(yǎng)SD大鼠下頜下腺細(xì)胞免疫學(xué)鑒定以α-淀粉酶和CK7作為下頜下腺細(xì)胞的標(biāo)記蛋白。α-淀粉酶和CK7陽(yáng)性表達(dá)的表現(xiàn)是下頜下腺細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)呈綠色熒光染色和棕色染色。α-淀粉酶免疫熒光染色和CK7免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果PBS液作為陰性對(duì)照。第2代SD大鼠下頜下腺細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)α-淀粉酶、CK7標(biāo)記蛋白。對(duì)照組結(jié)果陰性(圖4)。圖4SD大鼠下頜下腺細(xì)胞α-淀粉酶和CK7免疫學(xué)鑒定(×400)Fig4Immunologicalidentificationofα-amylaseandCK7inSMGCs(×400)2．5下頜下腺細(xì)胞在HP-HA-肝ECM水

水凝膠，初始為均質(zhì)白色固態(tài)，待完全溶解后為透明狀液體。將兩者交聯(lián)得到HP-HA-肝ECM水凝膠，無(wú)色無(wú)味透明狀，稍黏稠，30min完全成為凝膠狀態(tài)(圖2C)，分別包被于96孔板和48孔板中(圖2D～E)。2．3新生SD大鼠下頜下腺細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)第3天可見(jiàn)典型的上皮細(xì)胞貼壁，第4天時(shí)可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞，采用差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞后可得到形態(tài)較為一致的下頜下腺細(xì)胞，第5天時(shí)于顯微鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞呈多角形，邊界清晰，排列呈鵝卵石樣外觀;培養(yǎng)至第14天時(shí)，可見(jiàn)細(xì)胞排列緊密，呈鋪路石狀，胞漿豐富，可見(jiàn)分泌顆粒(圖3)。培養(yǎng)第14天時(shí)第1次傳代。圖2肝ECM成分的獲取及交聯(lián)Fig2Thepreparationofliverdecellularizedextracellularmatrixandcrosslink圖3原代培養(yǎng)的SD大鼠下頜下腺細(xì)胞形態(tài)(A:×200;B:×400)Fig3PrimarylyculturedsubmandibularglandcellsofSDrat(A:×200;B:×400)2．4體外培養(yǎng)SD大鼠下頜下腺細(xì)胞免疫學(xué)鑒定以α-淀粉酶和CK7作為下頜下腺細(xì)胞的標(biāo)記蛋白。α-淀粉酶和CK7陽(yáng)性表達(dá)的表現(xiàn)是下頜下腺細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)呈綠色熒光染色和棕色染色。α-淀粉酶免疫熒光染色和CK7免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果PBS液作為陰性對(duì)照。第2代SD大鼠下頜下腺細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)α-淀粉酶、CK7標(biāo)記蛋白。對(duì)照組結(jié)果陰性(圖4)。圖4SD大鼠下頜下腺細(xì)胞α-淀粉酶和CK7免疫學(xué)鑒定(×400)Fig4Immunologicalidentificationofα-amylaseandCK7inSMGCs(×400)2．5下頜下腺細(xì)胞在HP-HA-肝ECM水凝膠中的增殖情況實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志(JPractStomatol)2019Nov，35(6)·187·
【參考文獻(xiàn)】

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2 朱沙俊;徐天鑫;王雷;錢(qián)海鑫;王志偉;;小鼠胰島與肝臟脫細(xì)胞支架三維共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2015年12期

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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