發(fā)布時間：2017-04-03 15:03

  本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞向食道組織細(xì)胞誘導(dǎo)分化及其在食道組織再生中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）向食道平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的有效方法和機制，為食道組織工程提供種子細(xì)胞；探索電紡絲纖維、脫細(xì)胞食道粘膜與生物可降解聚氨酯（PU）復(fù)合支架的構(gòu)建以及動物體內(nèi)重建修復(fù)食道缺損的可行性方法。 方法 以密度梯度法提取和培養(yǎng)MSC，流式細(xì)胞術(shù)檢測CD29、CD34、CD45、CD44、CD90的表達(dá)情況。分別采用與成熟平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)，EGF等誘導(dǎo)劑直接誘導(dǎo)的方法，誘導(dǎo)MSC向平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞分化，通過形態(tài)觀察、免疫熒光染色等方法檢測上述誘導(dǎo)方法的有效性。另一方面，以靜電紡絲法制備PCL/SF（聚己內(nèi)酯/絲素）多孔納米纖維（模擬食道基膜niche），表面活性劑聯(lián)合DNA酶法制備脫細(xì)胞食道粘膜基質(zhì)，以生物可降解PU為基材制備具有微槽圖案的支架（支持肌組織生長），以正常食道的組織學(xué)構(gòu)造為導(dǎo)向，復(fù)合上述多層支架構(gòu)造，制備了可同時支持食道組織中粘膜、粘膜下層和肌層細(xì)胞和組織再生的復(fù)合支架。以MSC為種子細(xì)胞，新西蘭大白兔為實驗動物，首先行背部皮下埋植以檢測支架的組織相容性及支架在體內(nèi)的作用，包括炎癥、周圍組織供血、支架降解等；其次，建立小型動物缺損模型，以片狀支架植入頸段食道，以檢測支架與體內(nèi)食道的作用以及修復(fù)小范圍食道缺損的可行性；最后，在上述實驗成功的基礎(chǔ)上，構(gòu)建管狀食道支架，建立原位替代整環(huán)食道使其再生的技術(shù)，包括粘膜和肌層的再生。 結(jié)果 培養(yǎng)的MSC細(xì)胞梭形，呈旋渦狀排列，強表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的特征蛋白CD29、CD44、CD90；不表達(dá)CD34、CD45。誘導(dǎo)分化的MSC分別表達(dá)平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞的特異蛋白α-actin和CK14。動物皮下實驗結(jié)果顯示支架具有良好的生物學(xué)性能；原位替代實驗中，，所有兔子未出現(xiàn)吻合口瘺，染色結(jié)果顯示手術(shù)部位實現(xiàn)上皮化，并可見平滑肌再生。 結(jié)論 MSC采用上述方法可以完成平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。由電紡絲纖維、脫細(xì)胞食道粘膜與有槽化聚氨酯（PU）復(fù)合構(gòu)建的支架，能支持MSC的生長，植入動物體內(nèi)未出現(xiàn)免疫排斥，可原位支持食道粘膜和肌層的再生，這些技術(shù)有望實現(xiàn)對病變食道缺損的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 食道組織工程 電紡絲 脫細(xì)胞食道粘膜 支架
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 1 材料與儀器設(shè)備14-16
• 1.1 實驗材料14-15
• 1.2 實驗儀器15-16
• 2 種子細(xì)胞獲取與支架制備16-20
• 2.1 細(xì)胞原代培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化16-18
• 2.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞（MSC）提取、培養(yǎng)16
• 2.1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測 MSC16
• 2.1.3 MSC 的誘導(dǎo)分化及鑒定16-17
• 2.1.4 MSC 誘導(dǎo)分化的鑒定17-18
• 2.2 支架構(gòu)建18-20
• 2.2.1 基膜蛋白液和絲素蛋白的制備18
• 2.2.2 圖案化 PU 支架的制備18-19
• 2.2.3 電紡絲/PU 復(fù)合支架制備19
• 2.2.4 脫細(xì)胞基質(zhì)/PU/電紡絲復(fù)合支架制備19-20
• 3 MSC 細(xì)胞相容性與組織相容性研究20-23
• 3.1 MTT 檢測細(xì)胞的生長增殖20
• 3.2 皮下實驗20-21
• 3.2.1 皮下植入20
• 3.2.2 組織切片與染色20-21
• 3.3 食道原位替代實驗21-23
• 3.3.1 電紡絲/PU 支架替代21-22
• 3.3.2 MSC/電紡絲/PU 支架替代22
• 3.3.3 脫細(xì)胞基質(zhì)/PU 支架替代22
• 3.3.4 再生組織取材及檢測22-23
• 4 結(jié)果23-37
• 4.1 MSC 的培養(yǎng)及鑒定23-24
• 4.2 MSC 向平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化24-26
• 4.3 MSC 向上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化26-28
• 4.4 支架的細(xì)胞相容性28
• 4.5 支架的組織相容性-動物實驗28-37
• 4.5.1 皮下實驗28-30
• 4.5.2 電紡絲/PU 支架30-33
• 4.5.3 MSC/電紡絲/PU 支架33-35
• 4.5.4 脫細(xì)胞基質(zhì)/PU 支架35-37
• 5 討論37-40
• 6 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄A 主要試劑配制46-48
• 附錄B 中英文詞對照48-49
• 在學(xué)研究成果49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：284500