發(fā)布時間：2020-10-11 01:45

　　 膠體金微粒是直徑為1~100nm的納米級材料,屬于超細(xì)膠體金。膠體金微粒既有金屬的化學(xué)性質(zhì),又具有獨(dú)特的物理性質(zhì),同時還具有表面效應(yīng)等方面的特點(diǎn)。膠體金顆粒的形貌、大小及聚集狀態(tài)和其獨(dú)特的光學(xué)效應(yīng)有很大關(guān)聯(lián)。核酸探針由于具有一系列優(yōu)點(diǎn),比如:在合成上非常簡單,設(shè)計(jì)上也比較容易,并且在檢測時具有較好的靈敏度和特異性等,因此在核酸檢測中被用作一種重要的檢測工具。正是由于上述優(yōu)勢,不斷的有科研工作者對此進(jìn)行深入研究,設(shè)計(jì)了很多具有不同功能的新型檢測核酸探針,在很多方面都具有很重要的作用,比如:分子醫(yī)學(xué)、疾病攻克等方面都有重大貢獻(xiàn)。核酸適配體(Aptamer)是一段核酸序列,通常是利用體外篩選技術(shù)(SELEX)從核酸分子文庫中得到的一段寡核苷酸片段。核酸適配體在不同領(lǐng)域都有廣泛的用途,比如:生物制藥、生物傳感、納米技術(shù)等。本論文以此構(gòu)建了基于核酸適配體、核酸探針以及交聯(lián)金技術(shù)的新型檢測方法,可以高靈敏度的檢測小分子、離子及蛋白質(zhì)。針對這些,主要從兩個方面開展了工作:1、基于交聯(lián)金和核酸適配體技術(shù),構(gòu)建了一種通用膠體金檢測多種靶物質(zhì)的體系。在該體系中,我們發(fā)展了高靈敏度檢測ATP小分子、鉀離子和凝血酶的方法,基于交聯(lián)膠體金顆粒的原理,通過這種膠體金技術(shù)我們可以只用一種紫外分光光度計(jì)便可簡單地高靈敏地檢測到靶物質(zhì),甚至直接用肉眼觀察顏色判斷靶物質(zhì)的存在與否。與其他比色檢測方法相比,該方法的優(yōu)勢在于只用到了一種功能化膠體金顆粒,檢測到凝血酶最低下限為5fM,鉀離子的最低下限為50nM,ATP分子的最低下限為0.2nM。該方法方便簡單,不需酶的存在,無需復(fù)雜的儀器設(shè)備,費(fèi)用低,具有較好潛在應(yīng)用價值。2、基于聚合酶置換靶物質(zhì)的原理,構(gòu)建了一種超靈敏通用膠體金檢測蛋白質(zhì)的體系。在該體系中,通過設(shè)計(jì)核酸適配體,在利用交聯(lián)金和核酸適配體的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步加入了聚合酶聚合置換靶物質(zhì)循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)。當(dāng)沒有靶物質(zhì)存在時,膠體金、核酸適配體與核酸探針互補(bǔ)雜交,使得膠體金不發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象,膠體金的峰值不會發(fā)生偏移。當(dāng)靶物質(zhì)存在時,在聚合酶的作用下,核酸適配體可以與靶物質(zhì)特異性結(jié)合進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng),使靶物質(zhì)能達(dá)到0.5aM的檢測下限。
【學(xué)位單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R318;O648
【部分圖文】：

圖 1.1 Taqman 探針的工作原理[106]探針又被稱作雙雜交探針即 FRET 探針，是由兩條與模板成[114]。在兩條探針中，一條 3’ 端有報告熒光基團(tuán)，

碩士學(xué)位論文時，就會激發(fā)產(chǎn)生熒光信號，信號探針游離出來，熒光基團(tuán)間的距離an 探針比較，由于 Taqman 探針因?yàn)槟軐晒庑盘栠M(jìn)行一個實(shí)時監(jiān)測，個過程中，監(jiān)測到的信號強(qiáng)度和模的信號也很很強(qiáng)，當(dāng)模板的數(shù)量很督不到信號的發(fā)生。所以 FRET 探NP 基因分型分析[115]，而 Taqman 探 探針的特點(diǎn)，定量檢測分析活細(xì)胞內(nèi)胞內(nèi)，計(jì)算熒光強(qiáng)度的比值，得到ET 探針易產(chǎn)生二聚體且背景信號較

圖 1.3 核酶切割催化信號放大技術(shù)檢測 miRNA[126]核酶原有結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，使其變?yōu)榉�(wěn)定的發(fā)夾結(jié)構(gòu) Zn2+輔酶幫助下，最終對鏈霉親和素和 DNA 實(shí)現(xiàn)
【參考文獻(xiàn)】

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1 孟祥賢;欒瑞波;王柯敏;羊小海;郭秋平;;遺傳性β地中海貧血病CD17點(diǎn)突變的快速簡便檢測[J];生命科學(xué)研究;2007年04期

2 蔡衛(wèi)民,胡敏君;基因診斷與基因治療[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年11期

3 曾溢滔;血紅蛋白疾病的診斷和治療[J];中華血液學(xué)雜志;1996年08期

本文編號：2835862