目的:隨著組織工程和再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展,越來越多的學(xué)者認(rèn)識(shí)到生物材料能夠用于調(diào)控炎癥反應(yīng),理解生物材料與機(jī)體免疫系統(tǒng)之間的相互作用變得非常重要。其中巨噬細(xì)胞在該過程中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用,其M1/M2(經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞/替代活化巨噬細(xì)胞)極化狀態(tài)和炎性分泌功能會(huì)影響組織的預(yù)后。礦化膠原(Mineralized Collagen,MC)由羥基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)和膠原(Collagen,COL)兩種成分構(gòu)成,與天然骨組織具有相同的化學(xué)組成及微觀結(jié)構(gòu),具有優(yōu)于羥基磷灰石的骨誘導(dǎo)性。然而,生物材料植入體內(nèi)后最早期的狀態(tài)是手術(shù)創(chuàng)傷及炎癥反應(yīng),其修復(fù)過程并非僅與成骨細(xì)胞相關(guān)。目前礦化膠原植入體內(nèi)后對(duì)免疫系統(tǒng)的影響尚不明確。因此有必要就礦化膠原植入體內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞極化及炎癥功能的影響進(jìn)行深入研究,全面分析其植入體內(nèi)后的生物反應(yīng),更加全面的詮釋礦化膠原的優(yōu)異性能,為其今后在臨床的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究方法:將RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞分別接種于培養(yǎng)玻片(空白對(duì)照組,LPS+IFN-γ誘導(dǎo)組,IL-4誘導(dǎo)組)、MC、HA和COL表面,在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn):1.應(yīng)用免疫熒光方法觀察細(xì)胞形態(tài),用NIS-Elements D軟件計(jì)算細(xì)胞鋪展面積。2.應(yīng)用免疫熒光方法檢測巨噬細(xì)胞膜表面M1/M2特異性標(biāo)志分子CD86/CD206的表達(dá)。3.應(yīng)用ELISA方法檢測巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α和IL-10的分泌水平。結(jié)果:1.MC、HA和COL表面巨噬細(xì)胞形態(tài)均與對(duì)照組不同且三組之間也有差異。LPS+IFN-γ誘導(dǎo)組細(xì)胞鋪展面積(522.964±113.0528μm~2)最大,顯著高于其他5組(P0.0001);HA表面細(xì)胞鋪展面積(415.695±98.681μm~2)是MC表面細(xì)胞鋪展面積(242.004±31.759μm~2)的1.7倍,二者之間具有顯著差異(P0.0001)。2.MC表面增加了CD206+巨噬細(xì)胞(M2)的表達(dá);HA表面則表達(dá)更多的CD86+巨噬細(xì)胞(M1);COL在3d時(shí)生成的CD86+/CD206+共表達(dá)型巨噬細(xì)胞最多。3.MC增加了抑炎細(xì)胞因子IL-10的分泌,HA增加了促炎細(xì)胞因子TNF-α的分泌。結(jié)論:礦化膠原(MC)能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7向M2型極化,在刺激機(jī)體炎癥反應(yīng)方面性能優(yōu)于羥基磷灰石(HA)和膠原(COL),更有利于組織重建。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R318.08
【部分圖文】：

重要的、能夠調(diào)控機(jī)體疾病進(jìn)展和損傷后組織重建的調(diào)節(jié)器受到廣泛關(guān)注用好像一個(gè)閘門調(diào)控著宿主免疫反應(yīng)，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)[10]。巨噬細(xì)種多功能細(xì)胞，在不同刺激因素作用下，會(huì)表現(xiàn)出不同的極化表型[9]。根可以分為兩種極化類型：經(jīng)典活化的 M1 型和替代活化的 M2 型。M1 型可由 IFN-γ和 LPS、TNF-α誘導(dǎo)產(chǎn)生，主要分泌一些促炎因子，在炎癥反揮宿主免疫功能，同時(shí)導(dǎo)致機(jī)體正常組織的炎癥損傷，常見的標(biāo)記分S、CD86、TNF-α和 IL-6 等[11-13]。M2 型巨噬細(xì)胞可由 IL-4、IL-10 和 IL生，具有抗炎作用，通過分泌抗炎細(xì)胞因子下調(diào)免疫應(yīng)答，促進(jìn)傷口愈合建，在炎癥反應(yīng)后期發(fā)揮重要作用，常見的標(biāo)記分子為 CD206、CD163等[11,13-15]。經(jīng)典活化 M1 型和替代活化 M2 型巨噬細(xì)胞具有很強(qiáng)的動(dòng)態(tài)性和受體內(nèi)微環(huán)境中不同刺激因素的影響可以相互轉(zhuǎn)化[16]。組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞 到 M2 的連續(xù)表達(dá)譜，根據(jù)兩種極化分型所占比例的不同可以提示組織修復(fù)、重建方向與預(yù)后結(jié)果[13]（圖 1）。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果1 細(xì)胞形態(tài)RAW264.7 細(xì)胞分別接種在 MC、HA、COL 表面，LPS + IFN-γ 、IL-4 誘導(dǎo)作陽性對(duì)照組，不加任何刺激作為空白對(duì)照組，1d 后熒光染色觀察黏附細(xì)胞的形（圖 1.1）。從圖 1.1 中我們可以觀察到空白對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)為圓形、紡錘形；S + IFN-γ 誘導(dǎo)組細(xì)胞完全鋪展，形似變形蟲，伸出許多板狀偽足；IL-4 誘導(dǎo)組伸長；在 MC 表面，黏附細(xì)胞呈圓形，而且鋪展面積也較��；在 HA表面，黏細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大部分細(xì)胞伸出偽足，與 LPS + IFN-γ 誘導(dǎo)組的黏附細(xì)胞形態(tài)；在 COL 表面，黏附細(xì)胞形態(tài)各異，部分伸出偽足，部分為紡錘形或圓形。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果1 細(xì)胞形態(tài)RAW264.7 細(xì)胞分別接種在 MC、HA、COL 表面，LPS + IFN-γ 、IL-4 誘導(dǎo)作陽性對(duì)照組，不加任何刺激作為空白對(duì)照組，1d 后熒光染色觀察黏附細(xì)胞的形（圖 1.1）。從圖 1.1 中我們可以觀察到空白對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)為圓形、紡錘形；S + IFN-γ 誘導(dǎo)組細(xì)胞完全鋪展，形似變形蟲，伸出許多板狀偽足；IL-4 誘導(dǎo)組伸長；在 MC 表面，黏附細(xì)胞呈圓形，而且鋪展面積也較小；在 HA表面，黏細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大部分細(xì)胞伸出偽足，與 LPS + IFN-γ 誘導(dǎo)組的黏附細(xì)胞形態(tài)；在 COL 表面，黏附細(xì)胞形態(tài)各異，部分伸出偽足，部分為紡錘形或圓形。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819631