【摘要】：目的:納米羥基磷灰石(N-Hap)具有良好的生物活性及生物相容性,在骨組織工程領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,是生物醫(yī)療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。但是人工合成的納米羥基磷灰石對(duì)組織細(xì)胞的安全性也引起了人們的關(guān)注。本文合成了三種不同長(zhǎng)徑比的納米羥基磷灰石顆粒(N-Hap),以小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)為模型,研究了不同長(zhǎng)徑比N-Hap對(duì)BMSCs的體外安全性及其對(duì)BMSCs分化和礦化的影響。方法:1、采用水熱法合成三種不同長(zhǎng)徑比的N-Hap,并采用TEM、XRD和熒光光譜對(duì)其進(jìn)行理化性質(zhì)表征。2、從ICR小鼠體內(nèi)分離培養(yǎng)原代骨髓基質(zhì)細(xì)胞,通過(guò)四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞活性染色法、細(xì)胞器定位、堿性磷酸酶(ALP)染色、礦化結(jié)節(jié)形成等方法研究了三種N-Hap對(duì)BMSCs細(xì)胞活性、活性氧水平、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞成骨分化及礦化的影響等方面對(duì)N-Hap體外生物安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:1、通過(guò)TEM、XED和熒光光譜確定合成出三種棒狀N-Hap,長(zhǎng)徑比分別為1.71(S-Hap)、4.31(M-Hap)、6.23(L-Hap)。2、三種N-Hap混懸液在與細(xì)胞作用24 h、72 h后,S-Hap和M-Hap在濃度為20、40、80μg/ml對(duì)BMSCs活性有抑制作用,L-Hap濃度僅在80μg/ml對(duì)BMSCs活性有抑制作用,S-Hap和M-Hap在濃度為5、10μg/ml時(shí)對(duì)BMSCs活性無(wú)明顯影響。細(xì)胞活性染色實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)出相似的結(jié)果。濃度為20μg/ml的S-Hap、M-Hap和L-Hap與BMSCs作用3d后,N-Hap被細(xì)胞攝取主要定位于溶酶體,細(xì)胞活性氧水平及早期凋亡細(xì)胞數(shù)均隨N-Hap長(zhǎng)徑比的升高而降低。3、濃度為20μg/ml的S-Hap、M-Hap和L-Hap與BMSCs作用14 d后,ALP染色陽(yáng)性率隨N-Hap長(zhǎng)徑比增大而增大,其中S-Hap和M-Hap組的染色陽(yáng)性率小于只加成骨誘導(dǎo)劑的對(duì)照組,而L-Hap組的染色陽(yáng)性率大于對(duì)照組。作用21 d后,礦化結(jié)節(jié)染色結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,S-Hap和M-Hap組的礦化水平顯著降低,L-Hap組的礦化水平顯著升高。結(jié)論:本文合成出三種不同長(zhǎng)徑比的N-Hap顆粒,與BMSCs作用后,細(xì)胞活性及成骨分化能力差異顯著。L-Hap與BMSCs作用后,細(xì)胞活性最好,具有促進(jìn)成骨分化和礦化的能力。S-Hap和M-Hap則抑制BMSCs活性,細(xì)胞內(nèi)活性氧升高,早期凋亡細(xì)胞比例升高,具有抑制BMSCs成骨分化及礦化的作用。其中長(zhǎng)徑比最小的S-Hap引起的細(xì)胞毒性最大。其對(duì)細(xì)胞活性與分化的差異可能與其在細(xì)胞的內(nèi)吞情況有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R318.08
【圖文】：

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.3.1 X 射線衍射分析如圖2-1所示為不同條件下制備的S-Hap（HAPS）、M-Hap（HAPM）、L-Hap（HAPL）的圖譜。JCPDS No. 09-0432為六方相的Hap標(biāo)準(zhǔn)衍射圖。三個(gè)衍射峰均能與Hap標(biāo)準(zhǔn)衍射圖符合，說(shuō)明三種樣品的物相均為六方相的羥基磷灰石。所制備的樣品衍射峰較強(qiáng)，峰寬變窄，在特征峰位置，衍射峰尖銳，衍射雜峰少，表明實(shí)驗(yàn)得到的羥基磷灰石顆粒結(jié)晶度和純度較高。

L-HAP直徑為12 nm，長(zhǎng)度為范圍60-100 nm，長(zhǎng)徑比分別為1.7（1S-Hap）、4.3（1M-Hap）、6.23（L-Hap）。圖2-2 不同長(zhǎng)徑比的三種納米羥基磷灰石TEM圖。S-Hap、M-Hap、L-Hap是濃度為20μg/ml三種N-Hap在無(wú)血清的DMEM中的TEM照片

[44]等人的分離培養(yǎng)方法將BMSCs分離并培養(yǎng)。圖3-1可見BMSCs為貼壁細(xì)胞，多為梭狀或樹枝狀的細(xì)胞。圖 3-1 不同倍數(shù)下的原代 BMSCsA：40× B：10×

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1 方金洋;;納米羥基磷灰石對(duì)幼年骨生長(zhǎng)的影響[J];江西醫(yī)藥;2018年08期

2 楊薇;王健平;劉鑫U

本文編號(hào)：2788426