【摘要】：目的:口腔頜面部骨組織的缺損一直是臨床常見(jiàn)的疾病之一,在納米材料促成骨的系列研究過(guò)程中,已經(jīng)證明抗壞血酸碳點(diǎn)具有促成骨功能,但是這種新型的碳點(diǎn)納米材料是否與其他納米材料一樣對(duì)細(xì)胞具有毒性作用并不清楚。本研究從亞細(xì)胞角度分析,探索抗壞血酸碳點(diǎn)對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)內(nèi)線粒體的影響,從而為抗壞血酸碳點(diǎn)在成牙槽骨方面的研究及應(yīng)用提供依據(jù)。方法:1、從維斯塔大鼠股骨內(nèi)提取骨髓基質(zhì)細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng),取第3到5代細(xì)胞與抗壞血酸碳點(diǎn)共培養(yǎng)0h、24h、48h、72h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2、選取最佳實(shí)驗(yàn)濃度:四唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)不同濃度抗壞血酸碳點(diǎn)對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞增殖能力的影響,并選取最佳實(shí)驗(yàn)濃度;3、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量:CM-H2DCFDA染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的量;4、檢測(cè)對(duì)線粒體形態(tài)的影響:透射電鏡觀察線粒體形態(tài);5、檢測(cè)對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)的影響:JC-1染色后鏡下觀察線粒體結(jié)構(gòu);6、檢測(cè)對(duì)線粒體功能的影響:Western Blot檢測(cè)AMPKα的表達(dá),ATP檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ATP產(chǎn)量。結(jié)果:1、隨著抗壞血酸碳點(diǎn)濃度的增高,骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增殖能力下降;并選取最佳實(shí)驗(yàn)濃度40μg/m L;2、隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)ROS含量上升;3、隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),線粒體的形態(tài)逐漸發(fā)生裂變、固縮、空泡樣改變;4、隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),線粒體膜電勢(shì)降低;5、隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),AMPKα表達(dá)上升,ATP產(chǎn)量下降。結(jié)論:低濃度(濃度40μg/mL)的抗壞血酸碳點(diǎn)對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的影響較小;高濃度(濃度40μg/m L)的抗壞血酸碳點(diǎn)隨著濃度的升高及共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),抗壞血酸碳點(diǎn)可以引起骨髓基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)量增多,線粒體的形態(tài)改變、結(jié)構(gòu)喪失、功能減退。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R318.08;R782
【圖文】：

隨著與骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的抗骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增值率逐漸降低。低濃度（≤對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增值率影響不大；隨著抗度達(dá)到 50μg/mL 時(shí)，骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增值0μg/mL）相比細(xì)胞增值率顯著降低，差異具），故選擇 40μg/ml 的抗壞血酸碳點(diǎn)進(jìn)行后

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量

c.抗壞血酸碳點(diǎn)處理細(xì)胞 48h 組 d.抗壞血酸碳點(diǎn)處理細(xì)胞圖 2.3 透射電鏡下觀察線粒體的形態(tài)2.3.4 熒光探針 JC-1 染色檢測(cè)線粒體的結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 褚薇薇;聶蕾;和新盈;閆愛(ài)麗;周伊;吳庚利;王殿華;;細(xì)胞色素c在后處理抗大鼠腸缺血-再灌注損傷細(xì)胞凋亡中的變化[J];生理學(xué)報(bào);2010年02期

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本文編號(hào)：2753237