【摘要】：水凝膠是一種高含水量的三維網(wǎng)狀聚合物,在許多領(lǐng)域中被廣泛研究。水凝膠含水量高、粘彈性好,可塑性強(qiáng)等特性使水凝膠在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用被廣泛研究。而制備水凝膠材料的選擇,直接決定其能否作為一種理想的生物醫(yī)學(xué)材料。本文通過研究殼聚糖溫敏水凝膠中β-GP和NaHCO3用量對(duì)該體系成膠時(shí)間、形態(tài)等性能的影響,對(duì)水凝膠交聯(lián)條件進(jìn)行優(yōu)化。然后,通過調(diào)控EDC/NHS的用量和接枝時(shí)間,研究重組人源膠原與殼聚糖接枝的最優(yōu)條件。以所得交聯(lián)和接枝的最優(yōu)條件為基礎(chǔ),改變重組人源膠原和殼聚糖的比例,最終得出重組人源膠原/殼聚糖溫敏水凝膠體系的最優(yōu)方案,通過SEM、機(jī)械性能測(cè)試、細(xì)胞毒性與包埋實(shí)驗(yàn)等,評(píng)價(jià)了該體系的理化性能和生物相容性。(1)將NaHCO3作為交聯(lián)劑加入體系。研究結(jié)果表明,β-GP和NaHCO3均能提高水凝膠成膠速率,同時(shí)增加水凝膠機(jī)械強(qiáng)度,具有協(xié)同作用。NaHCO3的加入可以有效降低β-GP用量,改善高濃度β-GP的潛在細(xì)胞毒性。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明NaHC03對(duì)細(xì)胞活性無影響。最終得到200μl/ml,50%β-GP/0.6MNaHC03的最佳用量;(2)利用EDC/NHS接枝體系,構(gòu)建重組人源膠原與殼聚糖間酰胺鍵連接,進(jìn)行接枝。結(jié)果顯示,重組人源膠原與殼聚糖在溶液中成功接枝,EDC用量對(duì)成膠時(shí)間影響不大,接枝時(shí)間過短水凝膠會(huì)產(chǎn)生RHC溶出現(xiàn)象。16mMEDC、80mMNHS,接枝4h時(shí),水凝膠的壓縮模量最佳。(3)改變重組人源膠原和殼聚糖比例,最終確定凝膠制備方案。體系中重組人源膠原含量增加,伴隨絲網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)變多,凝膠中孔隙直徑增大,凝膠中細(xì)胞增殖生長(zhǎng)狀態(tài)隨之提高。綜合凝膠機(jī)械性能進(jìn)行評(píng)估,殼聚糖與重組人源膠原比例為3:1為最佳比例。
【學(xué)位授予單位】：南京理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R318.08
【圖文】：

ｍ型重組人源膠原蛋白是以人ｍ型膠原蛋白為模板，利用巴氏畢赤酵母作為表達(dá)宿逡逑主，穿梭質(zhì)粒ＰＰＩＣ９Ｋ為表達(dá)載體，構(gòu)建了同向六串聯(lián)類人膠原蛋白表達(dá)載體ｐＰＩＣ９ＫＧ６逡逑（圖１．１），通過電轉(zhuǎn)化將其轉(zhuǎn)入畢赤酵母中，誘導(dǎo)其表達(dá)的ｍ型重組人源膠原蛋白逡逑基因測(cè)序結(jié)果見圖１．２。重組人源膠原蛋白為本論文所用制備水凝膠的主要原料。逡逑ｒ邋％－邐Ｌ逡逑／邐ＰＰＪＣ９Ｋ邐ｋ逡逑＊邋４邐Ｋ？�。耍颠姡蛇娺娺娺婂�？郵逡逑…＼邐／邋：⑶邐ｆ邋叫似似邐Ｉ逡逑ｆ逡逑－）邋一逡逑圖１．１六串聯(lián)類人膠原蛋白基因表達(dá)載體ＰＰＩＣ９ＫＧ６的構(gòu)建逡逑＾邐９０邐１００邐ＩｌＯ邐１２０邐１３０邐１４０邐１５０邐１６０邐１逡逑二邋ＧＡ邋ｉＴＴＡＡＴＴ邋Ｃ邋ＧＣ邋ＧＧＣ邋Ｃ邋ＧＣ邋ＴＴＡＡＣ邋ＧＣＣＧＧＣＴＧＧ邋瓦邋ＣＴＴ邋ＧＧ邋ＴＴＡＣ邋ＣＴ邋ＧＧ邋Ｃ邋ＴＴＡＣ邋Ｃ邋ＴＴ邋ＧＣ１邋ＣＴ邋Ｃ邋ＣＡ＆邋（？邋丁丁邋ＧＡＣ邋Ｃ邋ＴＧ邋＆ＧＴＴＡＣ邋ＣＴ邋Ｇ邋ＧＴＴ邋ＧＡＣ邋Ｃ邋ＴＧ邋Ｇ邋ＡＧ邋ＡＡＣ邋ＣＴＴ邋Ｇ

邐重組人源膠原溫敏水凝膠的制備及性能研究逡逑重組人源膠原蛋白與Ｓｉｇｍａ公司的標(biāo)準(zhǔn)ＩＩＩ型膠原蛋白表征，如圖１．３所示。圖１．４Ａ逡逑電泳結(jié)果顯示，重組人源膠原蛋白的分子量為１１２邋ｋＤａ；圖Ｌ４Ｂ高效液相色譜圖顯示，逡逑重組人源膠原蛋白純度達(dá)９９．６８％。圖１．４Ｃ、Ｄ為重組人源膠原蛋白的氫譜和碳譜［６７］。逡逑Ａｂｓ邐Ｏｖｅｄａｙ邋－邋Ｓｒａａ逡逑Ａ邐—邋邐：邐：邐邐邐￣￣－￣Ｚ邋￣邋邐逡逑＾刪逡逑＿邋ｊｆ邋？邐邐邋：邐—邐：邋＿＿邐＼邋＿

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2732830