【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞膜片技術(shù)以及甲基丙烯酸明膠(GelMA)構(gòu)建預(yù)血管化傷口敷料,將其作用于裸鼠的皮膚缺損處,觀察該敷料對(duì)傷口愈合的影響,為臨床中皮膚損傷的修復(fù)提供一種新的治療思路。方法:1)預(yù)血管化細(xì)胞膜片的構(gòu)建及表征:提取兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),傳代培養(yǎng)至P2代備用;運(yùn)用MTT法測(cè)定兔BMSCs的生長(zhǎng)曲線;檢測(cè)兔BMSCs的多向分化能力;培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs);高密度接種兔BMSCs到培養(yǎng)皿培養(yǎng)10天后,接種HUVECs共培養(yǎng)5天,免疫熒光染色觀察預(yù)血管化的細(xì)胞膜片內(nèi)I型膠原的形成情況。2)預(yù)血管化細(xì)胞膜片復(fù)合GelMA水凝膠敷料的構(gòu)建:光交聯(lián)制備甲基丙烯酸明膠并利用FTIR、XRD等對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行表征,將預(yù)血管化細(xì)胞膜片進(jìn)行折疊至三層并與GelMA水凝膠共培養(yǎng)構(gòu)建預(yù)血管化傷口敷料。3)預(yù)血管化敷料運(yùn)用于裸鼠傷口愈合的實(shí)驗(yàn):構(gòu)建裸鼠全層皮膚缺損模型,將構(gòu)建的預(yù)血管化敷料作用于裸鼠傷口,分別在第1天、第7天、第14天觀察傷口愈合情況,并提取傷口處組織樣品進(jìn)行組織學(xué)染色,研究此敷料對(duì)宿主傷口愈合的影響。結(jié)果:1)倒置光學(xué)顯微鏡下可觀察到兔BMSCs呈長(zhǎng)梭形,MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果示兔BMSCs的生長(zhǎng)曲線成“S”形;多向分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果示兔BMSCs具有向成脂、成骨、成軟骨細(xì)胞分化的能力;免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)BMSCs膜片中細(xì)胞含量較高,細(xì)胞外基質(zhì)豐富,細(xì)胞與細(xì)胞之間連接存在,含有大量的I型膠原纖維;在預(yù)血管化細(xì)胞膜片上,HUVECs在水平、垂直方向上均發(fā)生遷移并在BMSCs上形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,BMSCs膜片為HUVECs的生長(zhǎng)和遷移提供了3D環(huán)境。2)FTIR結(jié)果表明甲基丙烯酸對(duì)明膠蛋白骨架結(jié)構(gòu)沒(méi)有顯著影響,BMSCs在GelMA水凝膠的細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較高的成活率。3)裸鼠背部預(yù)血管化構(gòu)建體移植成功,實(shí)驗(yàn)組愈合速度快于對(duì)照組;免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步顯示,在預(yù)血管化構(gòu)建體中體外預(yù)先形成的微血管結(jié)構(gòu)與宿主脈管系統(tǒng)發(fā)生吻合。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明由預(yù)血管化干細(xì)胞膜片與GelMA水凝膠構(gòu)建的新型皮膚敷料在免疫缺陷鼠的皮膚缺損修復(fù)再生實(shí)驗(yàn)中顯示出具有促進(jìn)傷口愈合的功能,但仍需大量的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及臨床研究進(jìn)一步探究其促進(jìn)傷口愈合的機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R318.08
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 預(yù)血管化細(xì)胞膜片復(fù)合 GelMA 水凝膠傷口敷料的構(gòu)建及其基礎(chǔ)應(yīng)用的研究時(shí)可以促進(jìn)管腔的形成并能夠保持其長(zhǎng)期穩(wěn)定性[42]。在研究當(dāng)歸（AS）提取物對(duì)體外人內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）和體內(nèi)斑馬魚的血管生成作用時(shí)發(fā)現(xiàn) AS 提取物可以促進(jìn) HUVECs 的數(shù)量、遷移量和血管平均長(zhǎng)度的顯著增加[43]。共培養(yǎng)HUVECs 和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）來(lái)構(gòu)建體外 3D 血管模型，并探究 VEGF在該模型中介導(dǎo)毛細(xì)血管等小血管形成中的作用，發(fā)現(xiàn) GBM 分泌的 VEGF 能夠誘導(dǎo) HUVECs 形成微血管腔[44]。綜上，研究發(fā)現(xiàn)，雖然 HUVECs 是生物組織工程中重要的血管形成細(xì)胞，但是單獨(dú)的 HUVCEs 無(wú)法獨(dú)立完成血管網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，因此需要特定的細(xì)胞外基質(zhì)，其中含有各種促進(jìn)血管生成的生長(zhǎng)因子，最好是該細(xì)胞外基質(zhì)自身能夠持續(xù)不斷地自發(fā)的去生成血管生成所需要的生長(zhǎng)因子以及其他介質(zhì)，在目前的研究中發(fā)現(xiàn) MSCs 作為外周細(xì)胞可以通過(guò)自生的分泌為內(nèi)皮細(xì)胞的血管化提供所需的各種介質(zhì)，已經(jīng)成為組織再生血管構(gòu)建中十分重要的血管周圍細(xì)胞。

而 VEGF 分泌幾乎保持恒定[73]。VEGF 和 HGF 分泌物之間的對(duì)比結(jié)果也可能與多層 HSMM 片中的缺血情況有關(guān)。眾所周知，低氧誘導(dǎo) VEGF 分泌[74]，并且在常氧條件下促進(jìn) HGF 分泌[75]。有研究發(fā)現(xiàn)將細(xì)胞膜片技術(shù)和靜電紡絲支架結(jié)合起來(lái)，快速構(gòu)建出能夠立即表達(dá)收縮基因的周向排列的人體主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的管狀構(gòu)建體，用于培養(yǎng)工程化血管組織結(jié)構(gòu)[76]。也有研究發(fā)現(xiàn)在預(yù)血管3D 組織結(jié)構(gòu)中，用內(nèi)皮細(xì)胞集落形成細(xì)胞（Endothelial cell colony forming cells,ECFCs）代替人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）與成纖維細(xì)胞膜片共培養(yǎng)后 3 天在成纖維細(xì)胞片構(gòu)建體中發(fā)現(xiàn)了管腔結(jié)構(gòu)[47]。Kang 等將細(xì)胞膜片技術(shù)與組織工程支架技術(shù)進(jìn)行了結(jié)合來(lái)構(gòu)建高水平的血管組織，基于細(xì)胞膜片工程技術(shù)整合血管化的仿生細(xì)胞膜片工程骨膜（CSEP）和可生物降解的大孔 β-磷酸三鈣（β-TCP）支架來(lái)設(shè)計(jì)血管化骨移植物骨膜（如圖 1.2），該構(gòu)建體不僅能夠模仿天然骨膜的空間構(gòu)型，而且還能促進(jìn)骨移植物的血管化和成骨潛能[38]。因此，細(xì)胞膜片技術(shù)在目前生物組織工程的構(gòu)建中十分重要的，特別是預(yù)血管化細(xì)胞膜片的構(gòu)建。

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本文編號(hào)：2719765