【摘要】：[目的]本課題利用鎂磺長石(akermanite,Aker)與海藻酸鈉(Sodium Aliginate,SA)、谷氨酸(glutamate,Glu)混合,形成可注射水凝膠,評估其促進新西蘭大白兔(New Zealand rabbit)上頜竇內(nèi)成骨成血管的效果,同時在體外探究其對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)成骨分化作用和遷移作用,并探索相應(yīng)的分子學(xué)機制。[材料與方法]1.制備鎂磺長石/谷氨酸/海藻酸鈉(Aker/Glu/SA)三元復(fù)合水凝膠體系,表征其材料自身的理化性能,制備相應(yīng)浸提液。2.通過細(xì)胞增殖實驗、實時定量聚合酶鏈擴增反應(yīng)、堿性磷酸酶染色及活性檢測、茜素紅染色、蛋白印跡實驗檢測材料浸提液對hBMSCs生物學(xué)行為的影響,并據(jù)此探索相應(yīng)的機制。3.通過實時定量聚合酶鏈擴增反應(yīng)、流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實驗、穿膜實驗檢測hBMSCs浸提液刺激下遷移性能的改變,并探索相應(yīng)的機制。4.構(gòu)建新西蘭大白兔上頜竇提升模型,通過一些列檢測,證明了復(fù)合水凝膠體系在動物體內(nèi)成骨成血管效果并做相應(yīng)分析。[結(jié)果]1成功制備鎂磺長石/谷氨酸/海藻酸鈉三元復(fù)合水凝膠體系。2復(fù)合水凝膠浸提液激活ERK信號通路,提高了人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨相關(guān)基因的表達(dá)。堿性磷酸酶活性顯著提高,同時骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌鈣基質(zhì)量明顯增多。3該水凝膠體系明顯促進了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面遷移相關(guān)受體(CXCR4)的表達(dá),并且提高了細(xì)胞的遷移率4體內(nèi)實驗顯示,該水凝膠體系明顯促進了上頜竇內(nèi)成骨,并且該材料內(nèi)有明顯的血管長入[結(jié)論]1鎂磺長石/谷氨酸/海藻酸鈉復(fù)合水凝膠體系能夠促進hBMSCs成骨分化2該水凝膠在促進成骨的同時提升了 hBMSCs的遷移能力3該水凝膠在體內(nèi)有明顯的成骨能力
【圖文】：

將８周兔髂骨骨髓體外培養(yǎng)一周后，每三天換液一歡，約２周后，細(xì)胞逐漸貼逡逑壁并增殖，形成多個圓形細(xì)胞集落，消化重懸后接入１０厘米培養(yǎng)皿培養(yǎng)。細(xì)胞在逡逑約３天后Ｍ指數(shù)增殖，約５天可達(dá)到９０％融合度ｓ圖１－２為負(fù)載入凝膠前兔骨髓間逡逑充質(zhì)于細(xì)胞（第二代）可見細(xì)胞成長梭形，中間為細(xì)胞核。其中散在的白色高點為逡逑細(xì)胞突起向上的細(xì)胞突《逡逑圖１－２■兔骨氉間，充威：干銅胞形：態(tài)（標(biāo)拓：２．００邋ｕ邋ｍ＞逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２，邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ｒａｂｂｉｔｓ２邋ＢＭＳＣｓ邋ｉｎ邋ｐａｓｓａｇｅ邋２．邋（ｓｃａｌｅ邋ｔｅｒ＝２００邋ｕ邋ｍ）逡逑１．３．２邋ＳＡＧ栛體外促羥基淲灰石沉積性能表征逡逑ＳＡ／Ａｋｅｒ／Ｇｌｕ水凝膠通過在培養(yǎng)液浸泡后檢測其表面輕基磷灰石（ＨＡ）沉積證逡逑明其體外生物活性。圖１－３顯示了浸袍７天后材料表面ＨＡ沉積情況。ａ圖可見，材逡逑料表面粗糙，，有礦物結(jié)晶沉積，類＃Ｉ于羥基磷灰石蠕蟲”狀結(jié)構(gòu)，后續(xù)ｂ圖紅外逡逑測試（ＦＴＩＲ）分析進一步該沉積物成分，１０３１．７５對應(yīng)羥基的Ｃ－０伸縮震動吸收逡逑－２３邋－逡逑

將８周兔髂骨骨髓體外培養(yǎng)一周后，每三天換液一歡，約２周后，細(xì)胞逐漸貼逡逑壁并增殖，形成多個圓形細(xì)胞集落，消化重懸后接入１０厘米培養(yǎng)皿培養(yǎng)。細(xì)胞在逡逑約３天后Ｍ指數(shù)增殖，約５天可達(dá)到９０％融合度ｓ圖１－２為負(fù)載入凝膠前兔骨髓間逡逑充質(zhì)于細(xì)胞（第二代）可見細(xì)胞成長梭形，中間為細(xì)胞核。其中散在的白色高點為逡逑細(xì)胞突起向上的細(xì)胞突《逡逑圖１－２■兔骨氉間，充威：干銅胞形：態(tài)（標(biāo)拓：２．００邋ｕ邋ｍ＞逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２，邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ｒａｂｂｉｔｓ２邋ＢＭＳＣｓ邋ｉｎ邋ｐａｓｓａｇｅ邋２．邋（ｓｃａｌｅ邋ｔｅｒ＝２００邋ｕ邋ｍ）逡逑１．３．２邋ＳＡＧ栛體外促羥基淲灰石沉積性能表征逡逑ＳＡ／Ａｋｅｒ／Ｇｌｕ水凝膠通過在培養(yǎng)液浸泡后檢測其表面輕基磷灰石（ＨＡ）沉積證逡逑明其體外生物活性。圖１－３顯示了浸袍７天后材料表面ＨＡ沉積情況。ａ圖可見，材逡逑料表面粗糙，有礦物結(jié)晶沉積，類＃Ｉ于羥基磷灰石蠕蟲”狀結(jié)構(gòu)，后續(xù)ｂ圖紅外逡逑測試（ＦＴＩＲ）分析進一步該沉積物成分，１０３１．７５對應(yīng)羥基的Ｃ－０伸縮震動吸收逡逑－２３邋－逡逑
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R783.1

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本文編號：2705339