【摘要】：目的:研究兩種自制新型引導(dǎo)骨組織再生膠原膜(魚膠原、豬膠原)對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,r BMSCs)成骨分化的影響以及其對SD大鼠顱頂骨缺損的修復(fù)作用。方法:采用掃描電子顯微鏡觀察兩組膜的表面形貌。用接觸角測量儀檢測兩種膜的水接觸角大小。在兩種膜上培養(yǎng)r BMSCs,并將r BMSCs接種在空白孔板上作為空白對照組。用CCK-8試劑盒測定1、3、5、7天時(shí)r BMSCs的增殖狀況;用激光共聚焦顯微鏡觀察培養(yǎng)1天時(shí)r BMSCs的粘附與伸展;成骨誘導(dǎo)5天后,r BMSCs的早期成骨分化水平利用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和活性檢測來測定;以茜素紅染色和鈣結(jié)節(jié)半定量測定法評定成骨誘導(dǎo)14天時(shí)r BMSCs細(xì)胞外基質(zhì)的礦化水平;用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化7天后相關(guān)成骨基因Bmp2、Col1、Runx2的相對表達(dá)量。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,在SD大鼠顱中縫兩側(cè)制備直徑5mm的骨缺損,在左側(cè)骨缺損區(qū)植入魚膠原膜或豬膠原膜,右側(cè)骨缺損區(qū)不植入材料作為空白對照組,3個(gè)月后采用micro-CT檢測顱頂骨骨再生情況。結(jié)果:掃描電子顯微鏡結(jié)果顯示魚膠原膜為致密表面,而豬膠原膜為無序纖維交錯(cuò)成的疏松多孔的表面。接觸角測量結(jié)果表明豬膠原膜的親水性強(qiáng)于魚膠原膜(P0.05)。CCK-8結(jié)果表明兩種膜及空白孔板上的r BMSCs在7天內(nèi)都持續(xù)增殖。激光共聚焦顯微鏡觀察到24小時(shí)后r BMSCs在兩組膜和空白孔板表面均鋪展良好。成骨誘導(dǎo)5天后,ALP染色和定量檢測結(jié)果顯示,豬膠原膜上r BMSCs的ALP活性高于魚膠原膜組和空白對照組。茜素紅染色和鈣結(jié)節(jié)半定量測定結(jié)果表明,14天后豬膠原膜上的r BMSCs細(xì)胞外基質(zhì)礦化水平高于魚膠原膜組和空白對照組。RT-PCR結(jié)果顯示,成骨誘導(dǎo)7天后,豬膠原膜上rBMSCs的相關(guān)成骨基因Bmp2、Col1、Runx2的相對表達(dá)量高于魚膠原組和空白對照組(P0.05)。體內(nèi)成骨實(shí)驗(yàn)(3個(gè)月)結(jié)果表明相對于魚膠原膜和空白對照組,豬膠原膜可顯著促進(jìn)大鼠顱頂骨再生(P0.05),魚膠原膜組和空白對照組大鼠顱頂骨再生無明顯差異。結(jié)論:豬膠原膜體內(nèi)外促進(jìn)骨再生的效果明顯優(yōu)于魚膠原膜,具有作為引導(dǎo)骨組織再生膜材料的潛能。
【圖文】：

拍攝 micro-CT，并用 Skyscan 軟件對結(jié)果進(jìn)行三1.5 統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)定量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用 SPSS19.0 軟件法進(jìn)行各組定量數(shù)據(jù)的比較。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 膠原膜的表征結(jié)果2.11 表面形貌觀察圖 1 可見兩組膜的形貌。數(shù)碼照片可見：魚膠原膜（1a）表面表面更光滑平整，無明顯孔洞，豬膠原膜表面呈疏松粗糙狀。觀察結(jié)果可見：魚膠原膜（1c）是由纖維無序交織成的致密平起。豬膠原膜是（1d）由纖維交織呈疏松多孔的表面。

圖 2 兩組膜的接觸角測量結(jié)果：魚膠原膜（2aFig.2 Contact angle measurement results of two gmembrane (2a), porcine collagen membrane (2b)2.2 膠原膜的體外細(xì)胞增殖、粘附及成骨性能檢2.2.1 細(xì)胞增殖檢測細(xì)胞增殖檢測 CCK-8 結(jié)果見圖 3。7 天內(nèi)，在數(shù)目均在增加，，呈持續(xù)增殖的狀態(tài)，表明兩組膠第 5 天時(shí)，豬膠原膜組的 rBMSCs 的數(shù)目多于7 天時(shí)，豬膠原膜組的 rBMSCs 數(shù)目多于對照組和空白對照組的 rBMSCs 數(shù)目無明顯差異。表增殖，魚膠原膜無明顯促進(jìn)作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R318.08

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本文編號：2701466