【摘要】：目的研究由人新鮮離體牙制備而成的人牙骨移植材料(HTBG)對巨噬細胞增殖分化以及炎癥反應(yīng)的影響,探討人牙骨移植材料在體外的生物相容性和細胞毒性。方法收集人的新鮮離體牙,經(jīng)試劑處理制備成人牙骨移植材料,而未經(jīng)試劑處理得到的是未處理牙齒顆粒,再以臨床中經(jīng)常使用的一種人工骨植入物作為對比,在掃描電鏡下觀察三種材料的表面形貌;分別將材料與細胞共培養(yǎng)24h后,用Hoechst 33342和羅丹明B進行細胞染色,在單光子共聚焦顯微鏡下觀察細胞形態(tài)數(shù)量變化,判定材料的細胞毒性;按照ISO 10993-12標準制備各材料的浸提液并進行分組:A組為(空白對照組)、B組為經(jīng)過試劑處理的牙粉顆粒(人牙骨移植材料組)、C組則選臨床常用的骨材料(人工骨植入物組)、D組作為陽性對照組是未經(jīng)試劑處理的牙齒顆粒(未處理牙粉組);取各組材料浸提液分別培養(yǎng)細胞,采用MTT法檢測各組浸提液在1、3、5、7d對細胞增殖分化的影響;通過錐蟲藍染色比較各材料浸提液在1-6d對細胞生長曲線的影響;通過流式細胞術(shù)檢測4組材料的浸提液對小鼠單核巨噬細胞RAW264.7細胞凋亡的影響;采用Western blot實驗方法定性檢測在各浸提液培養(yǎng)下的細胞對炎癥因子TNF-ɑ和IL-6的蛋白的表達;用ELISA方法定量檢測在各組材料浸提液培養(yǎng)下的細胞在1、3、5 d產(chǎn)生的TNF-ɑ和IL-6的具體含量。結(jié)果掃描電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)人牙骨移植材料表面有均勻的多孔形貌,具備有效的蛋白載體和支架的結(jié)構(gòu)而未處理牙粉組膠原纖維結(jié)構(gòu)及脫礦牙本質(zhì)層全層塌陷,無特定結(jié)構(gòu);共聚焦結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠單核巨噬細胞能夠在人牙齒移植材料和人工骨植入物上表現(xiàn)為正常的細胞形態(tài)和數(shù)量,與空白對照組細胞數(shù)量無明顯差別(P0.05),而與未處理牙粉組細胞數(shù)量差異顯著(P0.05);MTT檢測細胞活性顯示,B、C組的吸光度值(A492nm)均高于D組(未處理牙粉組)(P0.05),而A、B、C組之間無明顯差異;錐蟲藍染色示,各時間點A、B、C組細胞數(shù)量均顯著高于D組(P0.05),A、B、C組間無差異(P0.05);細胞凋亡示A,B和C組的凋亡率低于D組細胞(P0.05),而A、B、C組間亦無差別(P0.05);Western blot結(jié)果和ELISA檢測結(jié)果顯示,A、B、C組巨噬細胞釋放的TNF-α和IL-6均明顯低于D組(未處理牙粉組),差異顯著(P0.05),而A、B、C組之間無明顯差別。結(jié)論由人新鮮離體牙制備而成的人牙骨移植材料對巨噬細胞RAW264.7不會產(chǎn)生細胞毒性。人牙骨移植材料在對細胞毒性反應(yīng)方面與人工骨移植物相同,在體外具有良好的細胞生物相容性,具有成為潛在的修復(fù)種植體周圍骨缺損和其他相關(guān)骨缺損的骨移植材料。
【圖文】：

圖 1 人牙骨移植材料的制備圖注：A 為去除牙髓后的備用牙齒；B 為篩選為 1mm 的顆粒的工具；C 為粉碎后的牙齒顆粒；D 為進行試劑處理的牙齒顆粒。（三）掃描電鏡觀察材料形貌

掃描電鏡下各組材料的表面形態(tài)(×5K)
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R783.1

【參考文獻】

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本文編號：2636065