【摘要】：本文以大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為細(xì)胞基礎(chǔ),對(duì)脊髓損傷修復(fù)支架材料IKVAV接枝聚乳酸/聚乙二醇水凝膠進(jìn)行初步的細(xì)胞學(xué)研究,通過細(xì)胞和材料的共培養(yǎng)進(jìn)行細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性和細(xì)胞粘附性等實(shí)驗(yàn),對(duì)材料的細(xì)胞相容性進(jìn)行評(píng)價(jià)。主要研究結(jié)果如下： 全骨髓貼壁法分離和培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過頻繁換液以及控制消化時(shí)間對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),細(xì)胞從第三代開始呈現(xiàn)比較均一的細(xì)胞形態(tài),說明細(xì)胞純度得到了提高；進(jìn)行細(xì)胞生長曲線繪制、細(xì)胞周期測(cè)定、克隆形成集落實(shí)驗(yàn)以及誘導(dǎo)成骨成脂實(shí)驗(yàn)對(duì)BMMSCs的生物學(xué)性能進(jìn)行初步探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,分離培養(yǎng)出來的細(xì)胞形態(tài)比較均一、純度較高、增殖能力旺盛以及具有多向分化潛能,是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 在五種濃度(2mM,1mM,0.5mM,0.1mM和0.02mM) IKVAV多肽預(yù)包被的培養(yǎng)板中培養(yǎng)BMMSCs,24h的粘附率試驗(yàn)結(jié)果表明：濃度為0.1mM的多肽濃度最適合細(xì)胞的粘附；五種濃度多肽對(duì)細(xì)胞的增殖影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：0.1mM多肽組OD值大于其它組,對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用較為明顯,對(duì)細(xì)胞活力影響顯著；流式細(xì)胞儀對(duì)五種濃度多肽作用下細(xì)胞周期檢測(cè)的結(jié)果顯示：0.1mM多肽組細(xì)胞的S期的比例為32.29%,增殖情況強(qiáng)于其它組。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：IKVAV多肽在不同程度上可以促進(jìn)細(xì)胞更快的貼壁和增殖。 倒置顯微鏡下觀察水凝膠材料與BMMSCs的三維培養(yǎng)情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在接枝IKVAV水凝膠中均勻的生長,形態(tài)多呈長梭形鋪展開；細(xì)胞在未接枝IKVAV的水凝膠中細(xì)胞較為稀疏,形態(tài)多為圓形,粘附性不是很好。場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能很好的粘附于接枝IKVAV的水凝膠材料表面以及凝膠孔洞中,而幾乎沒有細(xì)胞粘附在未接枝多肽的水凝膠上。說明接枝IKVAV多肽的水凝膠具有較好的生物活性,適合用于脊髓修復(fù)的支架材料。
【學(xué)位授予單位】：武漢理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2527574