【摘要】：背景:誘導(dǎo)成骨細胞分化為骨細胞是組織工程中的研究熱點,但分化過程中的調(diào)節(jié)機制尚未完全闡明。MicroR NA是一類內(nèi)源性小RNA分子,可通過與靶基因mR NA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達。研究證實,microR NA在骨細胞分化過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。目的:研究mi R-155對成骨細胞骨分化的調(diào)節(jié)作用以及作用機制。方法:取小鼠成骨細胞系MC3T3-E1細胞,加入小鼠骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(200μg/L)進行成骨誘導(dǎo),并與誘導(dǎo)第1,3,7,14天,通過qR T-PCR檢測mi R-155 m RNA的表達。并將MC3T3-E1細胞分為對照組、誘導(dǎo)組、miR-155組和mi R-155 inhibitor組,對照組用α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng),誘導(dǎo)組在培養(yǎng)基中加入骨形態(tài)發(fā)生蛋白2進行成骨誘導(dǎo),mi R-155組和miR-155 inhibitor組在成骨誘導(dǎo)之前分別轉(zhuǎn)染miR-155和mi R-155拮抗劑,誘導(dǎo)2周。結(jié)果與結(jié)論:(1)茜素紅染色及堿性磷酸酶活性測定:經(jīng)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2誘導(dǎo)后,mi R-155 mR NA表達呈時間依賴性下調(diào)。誘導(dǎo)組MC3T3-E1細胞茜素紅著色強度、堿性磷酸酶活性和mR NA表達也顯著高于對照組(P0.01);mi R-155組茜素紅著色強度明顯低于誘導(dǎo)組,堿性磷酸酶活性和mR NA也明顯低于對照組(P0.01),而mi R-155 inhibitor組則呈反向變化(P0.05);(2)熒光報告基因檢測和western blot檢測:miR-155可與SMAD5 mR NA 3’非編碼區(qū)結(jié)合,并明顯降低MC3T3-E1細胞中SMAD5蛋白和mR NA表達(P0.01)。結(jié)果表明,mi R-155可通過負性調(diào)控SMAD5表達,抑制MC3T3-E1細胞的成骨分化。
[Abstract]:Background: osteoblast differentiation into osteoblasts is a hot topic in tissue engineering. However, the regulatory mechanism of osteoblast differentiation has not been fully elucidated. MicroRNA is a class of endogenous small RNA molecules. Gene expression can be regulated at post-transcriptional level by binding to the 3 '-terminal noncoding region of target gene mRNA. MicroRNA plays an important role in the process of osteocyte differentiation. Aim: to study the effect and mechanism of mi R 155 on bone differentiation of osteoblasts. Methods: bone morphogenetic protein 2 (200 渭 g / L) was added to mouse osteoblast cell line MC3T3-E1 to induce osteogenesis. The expression of mi R-155 m RNA was detected by QR T-PCR on the 7th and 14th day after induction. MC3T3-E1 cells were divided into control group, induction group and miR-155 inhibitor group. The control group was cultured on 偽 -MEM medium. In the induction group, bone morphogenetic protein 2 was added to the culture medium to induce osteogenesis. The miR-155 and mi R-155 antagonists were transfected into the culture medium for 2 weeks. Results and conclusion: (1) alizarin red staining and alkaline phosphatase activity: the expression of mi R-155mR na was down-regulated in a time-dependent manner after induction by bone morphogenetic protein 2 (BMP 2). The intensity of alizarin red staining, alkaline phosphatase activity and mRNA expression in MC3T3-E1 cells in induction group were significantly higher than those in control group (P0.01). The activity of alkaline phosphatase and mRNA were also significantly lower than those of control group (P0.01), while the expression of SMAD5 protein and mRNA in MC3T3-E1 cells decreased significantly (P0.01), while the expression of SMAD5 protein and mRNA in MC3T3-E1 cells were significantly decreased by fluorescence reporter gene detection (P0.05); (2) and western blot detection (P0.01). The results showed that R- 155 could inhibit the osteogenic differentiation of MC3T3-E1 cells through negative regulation of SMAD5 expression.
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院南湖院區(qū)創(chuàng)傷骨科;朝陽市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;吉林大學(xué)第一醫(yī)院干部病房;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81600016)~~
【分類號】：R318.08;R68

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本文編號：2153419