本文選題：神經(jīng)干細(xì)胞 + 慢病毒感染�。� 參考：《中國(guó)組織工程研究》2017年21期

【摘要】：背景:神經(jīng)干細(xì)胞作為近年來(lái)神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn),在神經(jīng)系統(tǒng)損傷治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景,但如何獲取大量純化且特征均一的終末神經(jīng)細(xì)胞是這一領(lǐng)域的難點(diǎn)。利用細(xì)胞內(nèi)熒光報(bào)告系統(tǒng)示蹤神經(jīng)干細(xì)胞分化的過(guò)程,并獲得純化的單一類型終末神經(jīng)細(xì)胞為這一難點(diǎn)的解決提供了可行的方案。目的:探討攜帶星形膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)志物GFAP基因的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光報(bào)告系統(tǒng)在神經(jīng)干細(xì)胞神經(jīng)分化示蹤中的價(jià)值。方法:原代分離小鼠胚胎的腦部皮質(zhì),經(jīng)機(jī)械消化和吹打后懸浮培養(yǎng),免疫熒光染色檢測(cè)其特異標(biāo)志物Nestin的表達(dá)以確定神經(jīng)干細(xì)胞。再將攜帶pL V/Final-neo-GFAP(promoter)-dT omato載體的慢病毒感染小鼠神經(jīng)干細(xì)胞,遺傳霉素G418篩選14 d后獲得純化神經(jīng)干細(xì)胞,然后誘導(dǎo)其向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化,顯微鏡觀察細(xì)胞紅色熒光(dT omato)的變化。誘導(dǎo)第13天采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)對(duì)表達(dá)紅色熒光的細(xì)胞行GFAP抗體復(fù)染。結(jié)果與結(jié)論:(1)原代分離獲得的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞呈Nestin表達(dá)陽(yáng)性;(2)慢病毒感染并篩選14 d后得到具有G418抗性的純化神經(jīng)干細(xì)胞;(3)該細(xì)胞經(jīng)神經(jīng)誘導(dǎo)分化后,顯微鏡下觀察到紅色熒光大量表達(dá),且GFAP復(fù)染與紅色熒光具有非常高的一致性;(4)實(shí)驗(yàn)成功地獲得了體外表達(dá)neo-GFAP(promoter)-dT omato載體的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞,該細(xì)胞可以體外示蹤GFAP基因的特異表達(dá),為神經(jīng)干細(xì)胞的定向神經(jīng)分化機(jī)制、細(xì)胞移植及組織工程產(chǎn)品開(kāi)發(fā)等研究提供了有力的工具。
[Abstract]:Background: neural stem cells (NSCs), as a hot topic in neuroscience research in recent years, have a broad application prospect in the treatment of nervous system injury. However, how to obtain a large number of purified and homogeneous terminal nerve cells is a difficult point in this field. The use of intracellular fluorescence reporting system to trace the differentiation of neural stem cells and obtain a single type of terminal nerve cells provided a feasible solution to this difficulty. Aim: to investigate the value of fluorescent reporting system driven by promoter of astrocyte-specific marker GFAP in neural stem cell differentiation. Methods: the brain cortex of mouse embryos was isolated and cultured by mechanical digestion and blow up. The expression of nestin was detected by immunofluorescence staining to determine the neural stem cells. Mouse neural stem cells were infected with lentivirus carrying pL V / Final-neo-GFAPN promoter -dT omato vector. The purified neural stem cells were obtained after G418 screening for 14 days, and then induced to differentiate into astrocytes. The changes of red fluorescent T omatoin were observed by microscope. On the 13th day of induction, GFAP antibody was restained to the cells expressing red fluorescence by cell immunofluorescence technique. Results and conclusion the primary isolated mouse neural stem cells were nestin positive and infected with lentivirus for 14 days. After screening for 14 days, purified neural stem cells with G418 resistance were obtained. A large amount of red fluorescence was observed under microscope, and there was a high consistency between GFAP restaining and red fluorescence. The mouse neural stem cells expressing neo-GFAPP promoter -dT omato vector were successfully obtained in vitro. This cell can trace the specific expression of GFAP gene in vitro, which provides a powerful tool for the study of neural stem cell differentiation mechanism, cell transplantation and tissue engineering product development.
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院腫瘤研究所;中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院分子診斷中心;中山大學(xué)干細(xì)胞與組織工程研究中心;
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(2014A030310013) 中國(guó)博士后基金(2014M562244)~~
【分類號(hào)】：R318

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2035458