本文選題：小腸細(xì)胞外基質(zhì) + 水凝膠�。� 參考：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景:小腸黏膜下層(small intestinal submucosa,SIS)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)是將小腸去除漿膜層、肌層及黏膜層,以及一系列加工和消毒處理后,獲得的一種不含細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)[1]。SIS是一種理想的組織工程學(xué)生物材料,在機(jī)體組織修復(fù)方面具有以下三個(gè)方面的生物學(xué)優(yōu)勢(shì):1.具有組織相容性,SIS主要由Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白構(gòu)成,并含有豐富的纖維連接蛋白及生長(zhǎng)因子,即使經(jīng)過(guò)一系列加工處理后SIS仍還有這些生長(zhǎng)因子。如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2、轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-β、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血小板源性生長(zhǎng)因子等,這些物質(zhì)均為正常細(xì)胞外基質(zhì)的成分。其中Ⅰ型膠原蛋白及纖維連接蛋白均可于細(xì)胞膜特異性結(jié)合,并激活細(xì)胞傳導(dǎo)通路促進(jìn)細(xì)胞的粘附,而其他各種生長(zhǎng)因子也可以刺激細(xì)胞增殖。因此,SIS不僅能為宿主細(xì)胞提供較佳黏附和遷移的自然環(huán)境,還能很快與宿主組織結(jié)合,促進(jìn)血管生成,恢復(fù)組織功能。2.具有免疫原性和安全性,經(jīng)過(guò)機(jī)械法和化學(xué)法聯(lián)合處理的SIS不含細(xì)胞,其攜帶病原體的概率很低,而且其免疫原性弱,即使異種移植后亦不產(chǎn)生排斥反應(yīng)。SIS經(jīng)消毒處理后,所含有的各種組分不會(huì)丟失或失活,超微結(jié)構(gòu)及機(jī)械特性無(wú)明顯改變。因此,經(jīng)消毒處理后SIS具有較高的安全性。同時(shí)Sarikaya A等[2]指出SIS浸出液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有抑制作用,可以抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。3.具有生物力學(xué)性能,小腸黏膜下層是一種非線性材料,在縱軸方向(無(wú)論是否刨開(kāi)管壁)的抗拉伸強(qiáng)度相當(dāng)于肌腱和韌帶組織的1/7到1/4。SIS作為體內(nèi)組織工程的材料,具有適當(dāng)?shù)臋C(jī)械特性,能承受周?chē)M織壓力,為再生細(xì)胞提供足夠的生長(zhǎng)空間。因?yàn)槠淞己玫纳飳W(xué)優(yōu)勢(shì),SIS已經(jīng)廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代生物材料和組織工程醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,如肌腱重建、下泌尿道重建、硬腦膜修補(bǔ)、血管重建、修復(fù)部分或全層皮膚損傷等[3]。目前關(guān)于SIS在肝臟組織損傷修復(fù)方面的研究較少,但其具有較大的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用潛力。因此,本研究使用豬小腸自制小腸黏膜下層細(xì)胞外基質(zhì),通過(guò)制備豬小腸黏膜下層(SIS)細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠,注射至由四氯化碳(CCL4)誘導(dǎo)肝損傷的損傷部位,以研究SIS細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料對(duì)化學(xué)性肝損傷的修復(fù)作用。通過(guò)探討注射性SIS細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料治療化學(xué)性肝損傷的可行性,為臨床上針對(duì)急、慢性肝損傷的修復(fù)和治療提供依據(jù)和新的方法。方法:1.取新鮮豬小腸組織,運(yùn)用SDS脫細(xì)胞和酶消化方法,制備小腸黏膜下層細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠;利用HE染色方法檢測(cè)基質(zhì)材料脫細(xì)胞效果;并檢測(cè)制作的水凝膠材料的溫度敏感性;MTT方法檢測(cè)水凝膠材料對(duì)人正常肝細(xì)胞的生物相容性。2.培養(yǎng)人正常LO2肝細(xì)胞,分為正常對(duì)照組、CCL4損傷組、水凝膠處理CCL4損傷細(xì)胞組,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況,Ed U細(xì)胞增殖染色法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況,ELISA方法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中b EGF、VEGF、NGF、IL-4、IL-6、IL-8含量的變化,以檢測(cè)自制小腸黏膜下層細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠對(duì)CCL4損傷肝細(xì)胞的修復(fù)作用。3.采用經(jīng)腹膜連續(xù)3個(gè)月注射四氯化碳法,建立C57/BL小鼠化學(xué)性肝損傷模型。在B超引導(dǎo)下,用31G注射針將自制小腸粘膜下基質(zhì)水凝膠注射至損傷肝包膜下。收集處理后小鼠的血清和肝組織,觀察SIS水凝膠對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠血清白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、以及肝組織病理改變的影響。結(jié)果:通過(guò)SDS處理和酶消化方法后,HE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)可以完全除掉豬小腸黏膜組織外的細(xì)胞,從而成功制備了豬小腸細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料,并具有明顯的溫度敏感性和生物相容性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),小腸細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料能夠減少CCL4誘導(dǎo)的損傷肝細(xì)胞凋亡;而Ed U檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)小腸細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料能夠促進(jìn)CCL4誘導(dǎo)的損傷肝細(xì)胞的增殖;ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)小腸細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠材料能夠促進(jìn)肝細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中b EGF、VEGF、NGF細(xì)胞因子含量,并減少促炎因子IL-6、IL-8的產(chǎn)生,而增加抗炎因子IL-4的產(chǎn)生。利用CCL4建立C57/BL小鼠肝損傷模型,成功在B超引導(dǎo)下將自制小腸粘膜下基質(zhì)水凝膠注射至損傷肝包膜下,經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)水凝膠處理組小鼠血清中ALB顯著上升,而ALT和AST轉(zhuǎn)氨酶的含量顯著下降,而HE檢測(cè)也發(fā)現(xiàn),豬小腸黏膜下層細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠注射有助于損傷肝組織的形態(tài)恢復(fù)。結(jié)論:本研究成工制備豬小腸細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其具有溫敏性和生物相容性,并能夠通過(guò)改善相關(guān)細(xì)胞因子分泌含量,促進(jìn)損傷肝細(xì)胞增殖并抑制其凋亡,從而減輕肝細(xì)胞損傷,并能夠注射至肝損傷小鼠體內(nèi),助于其肝臟修復(fù)和肝臟功能恢復(fù)。通過(guò)本研究將有助于為臨床肝損傷治療開(kāi)拓新方法,并為組織工程生物材料的研發(fā)和臨床利用提供基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬玉珍;陳瑋;韓景田;葉路;汪杰;;CCl_4攻擊小鼠致肝纖維化血清IL-4、IL-6、IL-8表達(dá)的影響[J];華西醫(yī)學(xué);2010年01期

2 楊浩;吳迪;李世和;朱曉松;;豬小腸黏膜下層基質(zhì)支架材料復(fù)合脂肪基質(zhì)干細(xì)胞的生物相容性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年03期

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本文編號(hào)：1938222