發(fā)布時(shí)間：2018-05-14 18:41

  本文選題：殼聚糖酶 + 殼聚糖��； 參考：《中國(guó)矯形外科雜志》2014年22期

【摘要】：[目的]探討攜帶殼聚糖酶(CSN)基因的重組慢病毒感染軟骨細(xì)胞后影響CSN活性的因素,及CSN在殼聚糖(CS)/DNA納米粒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞中的作用。[方法]構(gòu)建攜帶CSN和紅色熒光帶白(RFP)基因的重組慢病毒(LV-CSN)并感染兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡檢測(cè)其感染率;二硝基水楊酸比色法(DNS)檢測(cè)對(duì)CSN活性的影響因素;以CS/DNA納米粒介導(dǎo)體外基因轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,檢測(cè)CSN對(duì)CS/DNA納米粒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞的作用。[結(jié)果]帶RFP基因的LV-CSN感染軟骨細(xì)胞后48 h和第7 d,RFP表達(dá)率分別為(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.583)。p H值、溫度及銅離子濃度對(duì)CSN的活性有明顯影響。LV-CSN感染軟骨細(xì)胞后CS/DNA組的基因轉(zhuǎn)染效率顯著高于裸p DNA組和CS/DNA組(P0.05),但銅離子可以拮抗這種作用。[結(jié)論]在一定時(shí)間內(nèi)LV-CSN感染軟骨細(xì)胞后可穩(wěn)定表達(dá)CSN,CSN的活性受p H值、溫度及銅離子濃度的影響;CSN可提高CS/DNA對(duì)軟骨細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染效率,銅離子則可拮抗這種作用。
[Abstract]:[objective] to investigate the factors that affect the CSN activity of chondrocytes infected with recombinant lentivirus carrying Chitosanase (CSN) gene and the role of CSN in gene transfection of chondrocytes mediated by CSN / DNA nanoparticles. [methods] Recombinant lentivirus (LV-CSN) carrying CSN and red fluorescent band (RFP) gene was constructed and infected with rabbit articular chondrocytes. The infection rate of LV-CSN was detected by flow cytometry and fluorescence microscopy. Chondrocytes were transfected into chondrocytes by CS/DNA nanoparticles in vitro. The effect of CSN on gene transfection of chondrocytes mediated by CS/DNA nanoparticles was examined. [results] the rFP expression rates of LV-CSN infected chondrocytes with RFP gene were 91.40 鹵0.98% and 91.67 鹵1.00% at 48 h and 7 d, respectively. There was no significant difference between them. The gene transfection efficiency of CS/DNA group was significantly higher than that of bare p DNA group and CS/DNA group, but copper ion could antagonize the activity of CSN. [conclusion] after LV-CSN was infected with chondrocytes for a certain time, the activity of CSN could be stably expressed in chondrocytes. The effect of temperature and copper ion concentration on the expression of CSN could increase the gene transfection efficiency of CS/DNA on chondrocytes, and copper ion could antagonize this effect.
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院骨科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81272040) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):S2011010004808,S2013010016385) 廣東省科技計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(編號(hào):2012B031800451)
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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1 覃昱;甲殼素與組織工程[J];中國(guó)矯形外科雜志;2002年10期

2 呂璐璐;盧華定;陸慧瓊;張富程;趙慧清;;透明質(zhì)酸/殼聚糖/pEGFP納米粒介導(dǎo)體外基因轉(zhuǎn)染關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞與滑膜細(xì)胞的比較[J];中國(guó)矯形外科雜志;2012年11期

【共引文獻(xiàn)】

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2 劉正尼;湯睿;周致圓;顧巖;;構(gòu)建生物可降解性復(fù)合支架修復(fù)腹壁缺損的可行性研究[J];外科理論與實(shí)踐;2010年06期

3 陳列歡;劉萬(wàn)順;韓寶芹;位曉娟;楊朝忠;;三種角膜內(nèi)皮細(xì)胞載體膜片的性質(zhì)研究[J];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào);2005年06期

4 沈華,沈尊理,張佩華,張俊鋒,賈萬(wàn)新,張兆鋒,黃一雄;甲殼素涂層并預(yù)置引導(dǎo)纖維神經(jīng)導(dǎo)管的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2005年11期

5 高文彪;張巖睿;張軍;;膠原/殼聚糖止血敷料在外科傷口中的應(yīng)用[J];中國(guó)組織工程研究;2012年29期

6 陳伯瑋;徐千捷;趙霞;申聰云;步芬;劉升濤;李博;王歲樓;;高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖中5-羥甲基糠醛[J];藥物生物技術(shù);2014年05期

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2 曹鵬;眼科用殼聚糖共混膜的性質(zhì)及其生物相容性的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2004年

3 徐斌;基于溫敏性殼聚糖水凝膠的可注射性心肌組織工程的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

4 王敏;殼聚糖仿生復(fù)合材料的制備及其初步生物學(xué)評(píng)價(jià)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 吳德升,趙定麟,何北平,杜曉冰;修復(fù)周?chē)窠?jīng)缺損的組織工程研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;1997年02期

2 張曉玲,史須,于長(zhǎng)隆,傅欣,張繼英;Chitosan-DNA介導(dǎo)關(guān)節(jié)基因轉(zhuǎn)移的體外研究[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2003年03期

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4 于炎冰,左煥琮,任祖淵,郭京,趙奎明,胡萍,張黎;殼聚糖導(dǎo)管橋接周?chē)窠?jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2000年06期

5 劉彥春,王煒,曹誼林,商慶新,鐘偉;包埋后的幾丁質(zhì)與軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華外科雜志;1998年08期

6 張文濤,盧世璧,王繼芳,張伯勛;組織工程軟骨移植修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損[J];中華外科雜志;1998年10期

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8 曾春,蔡道章,全大萍,布麗斯,盧華定,李曉峰,史德海;TGF-β1殼聚糖緩釋微球的制備和體外檢測(cè)[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年03期

9 匡勇,侯春林,茍三懷,顧其勝;幾丁質(zhì)及幾丁糖與雪旺氏細(xì)胞相容性的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;1998年02期

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2 何清義,李起鴻;間歇性液態(tài)壓力和連續(xù)灌注系統(tǒng)下的軟骨細(xì)胞培養(yǎng)[J];中華骨科雜志;2000年09期

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4 江遜,曾耀英,何賢輝,徐麗慧,狄靜芳,馮錚,肇靜嫻,史劍波;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白在人軟骨細(xì)胞中的表達(dá)及修復(fù)重建人軟骨示蹤方法的研究[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年20期

5 劉杰,關(guān)谷勇人,楊舒,雍宜民;振動(dòng)刺激對(duì)培養(yǎng)軟骨細(xì)胞生物合成的影響[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年35期

6 盧華定,蔡道章,黃冬梅,曾春;Ⅰ型膠原三維立體支架高密度培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的增殖及其分泌功能[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年18期

7 張建黨,盧世璧,袁玫,黃靖香,趙斌,孫明學(xué),崔雪梅,許文靜;關(guān)節(jié)軟骨源性微載體與軟骨細(xì)胞的體外相容性[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2005年09期

8 李保林,王海彬,周正新,楊榮建,袁浩;兔軟骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J];廣州醫(yī)藥;2005年01期

9 郭全義;盧世璧;張莉;袁玫;眭翔;許文靜;;藻酸鈣凝膠為載體體外短期培養(yǎng)羊軟骨細(xì)胞的生物學(xué)性狀[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年01期

10 張莉;郭全義;眭翔;許文靜;袁玫;黃靖香;盧世璧;;羊軟骨細(xì)胞在生物反應(yīng)器中的培養(yǎng)和擴(kuò)增[J];中國(guó)矯形外科雜志;2006年06期

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2 任宏造;;軟骨細(xì)胞的超生結(jié)構(gòu)病理[A];第六次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];1990年

3 張楊;崔麗;郭悅;孫曉雷;李秀蘭;;滑膜細(xì)胞微環(huán)境對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[A];第十八屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

4 柏濤;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)軟骨細(xì)胞表型的研究進(jìn)展[A];玉溪市第三屆二次骨科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

5 周紅輝;萬(wàn)福生;;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

6 王正輝;吳寶俊;許珉;;殼聚糖/明膠復(fù)合不同軟骨細(xì)胞體外構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[A];全國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

7 馬劍雄;馬信龍;張華鋒;張園;王志鋼;楊陽(yáng);;生物力學(xué)因素在激素性股骨頭壞死中對(duì)軟骨細(xì)胞的作用[A];2009第十七屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

8 李建華;黃建榮;康奕飛;許繼德;涂永生;;體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞的研究[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

9 石印玉;曹月龍;馮偉;鄭昱新;石瑛;王翔;;補(bǔ)腎、柔肝中藥對(duì)軟骨細(xì)胞生物功能的影響[A];2004'中華中醫(yī)藥科技成果專(zhuān)輯[C];2004年

10 許道榮;金丹;肖庭輝;余斌;;長(zhǎng)時(shí)間拉伸應(yīng)變對(duì)軟骨細(xì)胞生化環(huán)境的影響[A];第20屆中國(guó)康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文選集[C];2011年

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2 吳一福;西安交大：用人胎兒軟骨細(xì)胞培養(yǎng)成功軟骨組織工程種子細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 中文;人體軟骨舉足輕重[N];廣東科技報(bào);2000年

4 劉霞;英用患者組織細(xì)胞成功培育出再生軟骨[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

5 保健時(shí)報(bào)特約記者 方序;體外“養(yǎng)”一塊軟骨補(bǔ)膝蓋[N];保健時(shí)報(bào);2011年

6 記者 張可喜;培養(yǎng)軟骨細(xì)胞[N];新華每日電訊;2002年

7 健康時(shí)報(bào)記者 李海清;軟骨破了打“補(bǔ)丁”[N];健康時(shí)報(bào);2009年

8 楊春;藥物增高不可信[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

9 黃楓 謝國(guó)平;中醫(yī)藥治療膝骨關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

10 記者 何屹;英國(guó)用干細(xì)胞成功培育出軟骨組織[N];科技日?qǐng)?bào);2005年

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2 楊運(yùn)東;骨炎定對(duì)體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2001年

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本文編號(hào)：1889032