本文選題：牙齦上皮細(xì)胞 + 細(xì)胞粘附��； 參考：《福建醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的 隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的粘結(jié)相關(guān)材料被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)科學(xué)研究，并為臨床科學(xué)研究作出許多重要貢獻(xiàn)。然而，現(xiàn)有材料不僅在量或質(zhì)方面無法滿足日新月異的科學(xué)需求，且生物相容性差。因此，尋找一種行之有效、可大量生產(chǎn)、生物相容性好的粘結(jié)材料是目前亟需解決的問題。本研究根據(jù)貽貝能夠超強(qiáng)粘附在各種物體表面的特性，選用貽貝足絲蛋白（Mussel Foot Protein, Mefp）及其粘附關(guān)鍵因子L-3,4-二羥基苯丙氨酸（L-Dioxyphenylalanine, L-DOPA）進(jìn)行牙齦上皮細(xì)胞的粘附實驗，同時對比幾種牙齦上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法，通過觀察細(xì)胞形態(tài)、繪制細(xì)胞生長曲線、測量細(xì)胞粘附量以及后續(xù)鈣離子濃度的測定評價Mefp和L-DOPA對牙齦上皮細(xì)胞的粘結(jié)作用，旨在尋找一種利于牙齦上皮細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)的方法，為臨床進(jìn)行牙齦上皮細(xì)胞的研究提供理論與技術(shù)支持。 方法 1.分別采用單純Dispaes酶消化、單純玻片覆蓋組織塊法以及Dispase酶消化聯(lián)合玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)Beagle犬牙齦上皮細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞形態(tài)以及細(xì)胞生長時間，對比尋找最適細(xì)胞培養(yǎng)方法。 2.培養(yǎng)皿表面分別經(jīng)Mefp、L-DOPA、多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)、蒸餾水處理后接種一定量細(xì)胞，通過二瞇基苯基吲哚(4,6-Diamidino-2-Phenylindole,DAPI)染色計數(shù)計算細(xì)胞粘附量；酶標(biāo)儀測量光密度值(Optical Density, OD)，，繪制細(xì)胞生長曲線；掃描電子顯微鏡(Scanning Electron Microscopy, SEM)觀察細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測定分析細(xì)胞增殖能力。并與空白組的作用進(jìn)行對比。 結(jié)果 1.單純Dispase酶消化培養(yǎng)的牙齦上皮細(xì)胞貼壁少，培養(yǎng)成功率為0.0%。單純玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)細(xì)胞貼壁多，但成纖維細(xì)胞污染嚴(yán)重，培養(yǎng)成功率僅為30.5%。Dispase酶消化聯(lián)合玻片覆蓋組織塊法培養(yǎng)，短時間內(nèi)可獲得大量牙齦上皮細(xì)胞，且不存在成纖維細(xì)胞污染，成功率可達(dá)91.6%。卡方檢驗表明，各組細(xì)胞培養(yǎng)成功率有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 2. Mefp處理組與空白組相比，鏡下DAPI染色細(xì)胞多，細(xì)胞呈扁圓形，棘明顯可見，48h細(xì)胞OD值高（P0.05），呈典型S型生長，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度也較空白組高（P0.05）；但與PLL處理組相比并無顯著差異（P0.05）。L-DOPA處理組與空白組相比，鏡下DAPI染色細(xì)胞多，細(xì)胞呈扁圓形，偽足明顯，48h細(xì)胞OD值高（P0.05），呈典型S型生長，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度也較高（P0.05）；而與Mefp處理組及PLL處理組相比，DAPI染色細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度亦顯著增多（P0.05）。 結(jié)論 1. Dispase酶消化聯(lián)合玻片覆蓋組織塊法進(jìn)行牙齦上皮細(xì)胞培養(yǎng)，可短時間獲得大量牙齦上皮細(xì)胞，此法簡單、有效。 2. Mefp及L-DOPA可顯著提高牙齦上皮細(xì)胞的粘附，其作用同PLL相似。
[Abstract]:objective
With the development of science and technology, more and more adhesive related materials have been widely used in medical science research, and make many important contributions to clinical scientific research. However, the existing materials are not only unable to meet the new scientific needs in quantity or quality, but also have poor biocompatibility. Therefore, it is effective to find a kind of effective and large amount of production. The adhesive material with good biocompatibility is an urgent problem to be solved at present. In this study, the adhesion of Mussel Foot Protein (Mefp) and L-3,4- two hydroxy phenylalanine (L-Dioxyphenylalanine, L-DOPA), which is the key factor of mussels, can be used to adhere to the surface of various objects. At the same time, the methods of primary culture of several gingival epithelial cells were compared. By observing cell morphology, plotting cell growth curve, measuring cell adhesion and measuring the subsequent calcium concentration, the binding effect of Mefp and L-DOPA on gingival epithelial cells was evaluated in order to find a kind of proproic and subculture culture of gingival epithelial cells. Methods to provide theoretical and technical support for the clinical study of gingival epithelial cells.
Method
1. the Beagle canine gingival epithelial cells were cultured by simple Dispaes enzyme digestion, simple glass covered tissue block method and Dispase enzyme digestion combined with slide covered tissue block method. The optimum cell culture method was compared by observing cell morphology and cell growth time.
2. the surface of the Petri dish was treated with Mefp, L-DOPA, Poly-L-Lysine (PLL) and distilled water to inoculate a certain amount of cells and calculate the cell adhesion by two squinyl phenyl indole (4,6-Diamidino-2-Phenylindole, DAPI), and the density value (Optical Density, OD) was measured by the enzyme labeling instrument, and the cell growth curve was plotted; scanning electron The morphology of the cells was observed by Scanning Electron Microscopy (SEM), and the intracellular calcium concentration was used to determine the cell proliferation ability and to compare the effect of the blank group.
Result
1. the gingival epithelial cells cultured with simple Dispase enzyme digestion were less adherent, and the success rate of culture was 0.0%. simple glass covered tissue block method, but the fibroblasts were more polluted. The success rate of the culture was only 30.5%.Dispase enzyme digestion combined with glass covered tissue block method, and a large number of gingival epithelial cells could be obtained in a short time. There was fibroblast contamination, and the success rate was 91.6%.. Chi square test showed that the success rate of cell culture was statistically significant (P0.05).
2. Mefp treatment group compared with the blank group, the DAPI staining cells were many, the cells showed flat circle, the spines were obviously visible, the 48h cell OD value was high (P0.05), the growth of S type was typical, the intracellular calcium concentration was higher than that of the blank group (P0.05), but there was no significant difference compared with the PLL treatment group (P0.05) the.L-DOPA treatment group was compared with the blank group, the microscope DAPI stained cells were compared. The cells showed a flat circle, the pseudo foot was obvious, the 48h cell OD value was high (P0.05), which showed a typical S type growth, and the intracellular calcium concentration was also higher (P0.05). Compared with the Mefp treatment group and the PLL treatment group, the DAPI staining cells and the intracellular calcium concentration were also significantly increased (P0.05).
conclusion
1. gingival epithelial cells were cultured by Dispase enzyme digestion combined with slide covering tissue block method, and a large number of gingival epithelial cells could be obtained in a short time. This method is simple and effective.
2. Mefp and L-DOPA can significantly enhance the adhesion of gingival epithelial cells, which is similar to PLL.

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R783.1

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本文編號：1793069