本文選題：骨組織工程 + 羥基磷灰石　； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：背景：利用骨組織工程學(xué)的理論,通過成骨細(xì)胞與支架共培養(yǎng),測量細(xì)胞在材料上的增殖、分化情況,以此來評估生物支架材料的細(xì)胞相容性。目的：從細(xì)胞學(xué)角度評價復(fù)合材料納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2對成骨細(xì)胞增殖、分化的影響,了解其細(xì)胞相容性,并與同種異體骨比較,為該材料的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法：采用改良膠原酶消化法處理新生24h內(nèi)Wistar大鼠的顱蓋骨,并進(jìn)行成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)。通過堿性磷酸酶染色、蘇木精-伊紅染色、鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色、倒置相差顯微鏡對提取的成骨細(xì)胞進(jìn)行觀察與鑒定。然后將培養(yǎng)狀況良好的第3代細(xì)胞與納米羥基磷灰石／膠原/重組人骨形成蛋白-2支架材料體外復(fù)合培養(yǎng)。培養(yǎng)第3,6,9d后,采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),堿性磷酸酶活性測定法、MTT法測定支架材料對成骨細(xì)胞分化、增殖的影響。結(jié)果：1、通過原代培養(yǎng)提取的成骨細(xì)胞呈圓形懸浮于混合培養(yǎng)液中,2小時后開始逐漸貼壁。培養(yǎng)3天后,顯微鏡下可見細(xì)胞呈梭形及不規(guī)則形。堿性磷酸酶染色大部分細(xì)胞(95%以上)呈陽性,經(jīng)茜素紅染色可見紅色礦化結(jié)節(jié)。2、ALP法和MTT法：該材料對成骨細(xì)胞增殖分化效果良好,并可促進(jìn)成骨作用。3、倒置相差顯微鏡下見納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2復(fù)合材料周圍聚集大量成骨細(xì)胞,并隨時間增殖。4、掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2復(fù)合支架表面有大量成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié),與對照組比較差異明顯,進(jìn)一步證實有利于骨形成。結(jié)論：納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2材料較同種異體骨材料對于成骨細(xì)胞的黏附、生長、分化、增殖效果更好,證明其具備良好的細(xì)胞相容性,有望為骨組織工程提供一種新的骨科修復(fù)材料。
[Abstract]:Background: by using the theory of bone tissue engineering, the cell proliferation and differentiation were measured by co-culture of osteoblasts and scaffolds to evaluate the cytocompatibility of scaffold materials. Objective: to evaluate the effect of nano-hydroxyapatite / collagen / recombinant human bone morphogenetic protein-2 on the proliferation and differentiation of osteoblasts from the cytological point of view, and to understand its cytocompatibility and compare it with that of allogeneic bone. To provide experimental basis for the clinical application of the material. Methods: calvaria of neonatal Wistar rats was treated with modified collagenase digestion method and osteoblasts were cultured in primary culture. The extracted osteoblasts were observed and identified by alkaline phosphatase staining hematoxylin eosin staining calcium nodule alizarin red staining and inverted phase contrast microscope. The third passage cells were cultured with nano-hydroxyapatite / collagen / recombinant human bone morphogenetic protein-2 scaffold in vitro. The cell morphology was observed by inverted phase contrast microscope and the effect of scaffold material on the differentiation and proliferation of osteoblasts was measured by MTT assay. Results the osteoblasts cultured in primary culture were suspended in the mixed medium for 2 hours and then gradually adhered to the wall. After 3 days of culture, the cells were spindle-shaped and irregular under microscope. Alkaline phosphatase staining was positive in most cells (> 95%). By alizarin red staining, red mineralized nodule. 2ALP and MTT showed that the material had a good effect on the proliferation and differentiation of osteoblasts. Under inverted phase contrast microscope, a large number of osteoblasts were observed around nano-hydroxyapatite / collagen / recombinant human bone morphogenetic protein-2 composites. The results of scanning electron microscopy showed that there were a large number of mineralized osteoblast nodules on the surface of nano-hydroxyapatite / collagen / recombinant human bone morphogenetic protein-2 composite scaffold, which was significantly different from that of the control group. Conclusion: the effect of nano-hydroxyapatite / collagen / recombinant human bone morphogenetic protein-2 on osteoblast adhesion, growth, differentiation and proliferation is better than that of homologous bone graft. It is expected to provide a new orthopedic repair material for bone tissue engineering.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R318.08

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本文編號：1778817