發(fā)布時間：2016-11-07 15:23

  本文關(guān)鍵詞：濃縮生長因子纖維蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學(xué)》 2015年

濃縮生長因子纖維蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及分化的影響

狄婧  

【摘要】：目的：濃縮生長因子纖維蛋白(Concentrated Growth Factors, CGF)為自體血經(jīng)不間斷差速離心制備而成的富含多種高濃度生長因子的纖維蛋白,具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、趨化和刺激血管化的功能,能夠加速軟硬組織修復(fù),是再生醫(yī)療領(lǐng)域中的新技術(shù)。本實驗以體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為研究對象,觀察CGF對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及分化的影響,為CGF作為骨組織工程的生長因子源提供論實驗依據(jù)。方法：1、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)選取健康的4周齡雄性Wistar大鼠,在無菌條件下取其雙側(cè)脛骨和股骨,通過全骨髓貼壁法對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離、純化,收集第2-4代細(xì)胞用于后續(xù)實驗。2、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定(1)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。(2)采用免疫組化染色對細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34、CD44進(jìn)行鑒定。3、CGF的制備選取健康的4周齡雄性Wistar大鼠,每只采集靜脈血各5ml,放入真空采血管中,分別置于Medifiuge離心加速機(jī)的轉(zhuǎn)筒中,按照制備程序,制備出CGF。4、實驗分組①細(xì)胞增殖分為兩組：按基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入CGF與否,分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組和基礎(chǔ)培養(yǎng)基組(對照組),并選擇4個時間點(1d、3d、5d、7d)分別對比觀察兩組細(xì)胞增殖情況。②細(xì)胞分化分為四組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組、礦化誘導(dǎo)液組、礦化誘導(dǎo)液+CGF組和基礎(chǔ)培養(yǎng)基組(對照組),同樣選擇7d和14d兩個時間點,對比觀察各時間點骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)情況。5、應(yīng)用MTT方法檢測CGF對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性的影響。6、應(yīng)用堿性磷酸酶試劑盒檢測成骨誘導(dǎo)各組細(xì)胞的堿性磷酸酶活性。7、成骨誘導(dǎo)14天后,對實驗各組進(jìn)行茜素紅染色和鈣化顆粒的半定量分析。8、應(yīng)用實時定量PCR的方法對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨相關(guān)基因堿性磷酸酶(ALP)、I-型膠原蛋白(Col-Ⅰ)、骨橋蛋白(OPN)、骨鈣素(OCN)mRNA表達(dá)量的檢測。9、統(tǒng)計學(xué)分析所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,以P0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：1、本研究成功地應(yīng)用全骨髓貼壁法在體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞大部分為長梭形,生長速度快,并以漩渦狀分布。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示CD44染色陽性,CD34染色陰性。2、離心后,可見真空采血管中血液分為三層,頂層為貧血小板血漿,底部是紅細(xì)胞層,兩者之間為纖維蛋白凝膠層即CGF。3、MTT結(jié)果顯示：經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析,在第1天和第3天,基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組和對照組的吸光度值無顯著性差異(P0.05)；在第5天和第7天,基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組的吸光度值高于對照組,經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析存在顯著性差異(P0.05)。4、堿性磷酸酶結(jié)果顯示,在第7天和14天,礦化誘導(dǎo)液+CGF組的ALP活性均高于其余三組,礦化誘導(dǎo)液組次之,對照組的ALP活性最低,各組間兩兩比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5、茜素紅染色及鈣化顆粒的半定量分析：成骨誘導(dǎo)14d后,在倒置顯微鏡下能觀察到礦化顆粒的形成,并且礦化誘導(dǎo)液+CGF組所形成的顆粒數(shù)量最多,而對照組即基礎(chǔ)培養(yǎng)基組的礦化顆粒最少。此外,礦化顆粒經(jīng)氯化十六烷基吡啶溶解后,各組吸光度值(以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示)：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組,0.6914±0.0136；礦化誘導(dǎo)液組,1.1607±0.0651；礦化誘導(dǎo)液+CGF組,1.6685±0.0211；對照組,0.2102±0.0231,各組間兩兩比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)6、RT-PCR結(jié)果顯示,BMSCs在經(jīng)過誘導(dǎo)7d、14d后,礦化誘導(dǎo)液+CGF組的ALP、Col-Ⅰ、OPN、OCN等成骨相關(guān)基因的mRNA表達(dá)均明顯高于其它三組(P0.05)。無論是誘導(dǎo)培養(yǎng)7d還是14d,各組ALP、Col-Ⅰ、OPN、OCN的mRNA表達(dá)量均以礦化誘導(dǎo)液+CGF組最高,礦化誘導(dǎo)液組次之,基礎(chǔ)培養(yǎng)基+CGF組再次之,對照組即基礎(chǔ)培養(yǎng)基組最低,各組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、本實驗成功分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定,驗證了所得細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。2、CGF能明顯促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外的早期增殖。3、CGF可以加強(qiáng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成骨誘導(dǎo)能力,同時,其單獨應(yīng)用亦具有一定的成骨誘導(dǎo)能力。4、CGF制取簡單,成本較低,因其含有大量細(xì)胞因子,有望作為骨組織工程的生長因子源,刺激種子細(xì)胞增殖分化。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.1
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 柳宏志;李超;王天祥;劉屹嵩;張立霞;鄒高峰;;CGF聯(lián)合骨代用品在即刻種植中修復(fù)種植體周圍骨缺損的實驗研究[J];口腔頜面外科雜志;2012年04期

2 龔博林;方圓文;;濃縮生長因子治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的療效觀察[J];中國老年保健醫(yī)學(xué);2013年06期

3 寧佳;張瑋;柳洪志;;濃縮生長因子在骨組織再生和修復(fù)上的作用研究進(jìn)展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2012年15期

4 張曉;董福生;任貴云;董玉英;栗興超;李建英;馮曉偉;王國光;;富自體CGF纖維蛋白膜對人牙齦成纖維細(xì)胞黏附及增殖的影響[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沈?qū)?唐增斌;韋惠平;陳偉;;上頜竇底內(nèi)提升同期牙種植術(shù)的臨床應(yīng)用研究[J];廣西醫(yī)學(xué);2015年02期

2 鄧雪蓮;于春梅;鄭喜璇;;金因肽聯(lián)合半導(dǎo)體激光治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的臨床分析[J];北方藥學(xué);2015年09期

3 龔博林;方圓文;;濃縮生長因子治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的療效觀察[J];中國老年保健醫(yī)學(xué);2013年06期

4 張曉鵬;鄒高峰;李超;柳宏志;張麗霞;魏麗;;CGF聯(lián)合骨代用品在促進(jìn)骨缺損愈合的實驗研究[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2014年03期

5 沈?qū)?唐增斌;韋惠平;陳偉;;上頜竇內(nèi)提升植骨及同期牙種植術(shù)的臨床應(yīng)用[J];中國美容醫(yī)學(xué);2014年22期

6 劉志剛;李慧;;中西醫(yī)結(jié)合治療頑固性口腔黏膜潰瘍的臨床觀察[J];中國老年保健醫(yī)學(xué);2015年04期

7 王天祥;李超;鄒高峰;王秋旭;柳宏志;孟雪;;濃縮生長因子促進(jìn)犬種植體周圍骨缺損修復(fù)的實驗研究[J];中國口腔頜面外科雜志;2013年03期

8 萬永;陳新;陳紅亮;孫勇;;富血小板纖維蛋白在即刻種植間隙處理中的應(yīng)用[J];西南國防醫(yī)藥;2013年09期

9 馬穎;趙彤;劉婷葳;趙麗偉;張寶震;黨洪濤;姚玲玲;唐海晨;;金因肽聯(lián)合半導(dǎo)體激光治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍臨床觀察[J];中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué);2014年12期

10 王熙;劉莎;;CGF在牙種植體周圍骨缺損修復(fù)中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2015年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李鋼;淫羊藿苷及富自體濃縮生長因子促進(jìn)兔顱骨缺損修復(fù)的分子機(jī)制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 徐燕,李頌,程繼光,胡勇,王明麗;人牙齦成纖維細(xì)胞和牙周膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和生物學(xué)特征[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2002年06期

2 徐明耀;陳勇;王志勇;;異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)膜在口腔黏膜組織缺損修復(fù)中的應(yīng)用[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2008年06期

3 柳宏志;鄒高峰;王天祥;李超;;濃縮生長因子促進(jìn)犬軟組織損傷修復(fù)的實驗研究[J];口腔頜面外科雜志;2013年01期

4 柳宏志;李超;王天祥;劉屹嵩;張立霞;鄒高峰;;CGF聯(lián)合骨代用品在即刻種植中修復(fù)種植體周圍骨缺損的實驗研究[J];口腔頜面外科雜志;2012年04期

5 寧佳;張瑋;柳洪志;;濃縮生長因子在骨組織再生和修復(fù)上的作用研究進(jìn)展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2012年15期

6 鄭磊,王前,裴國獻(xiàn);可降解聚合物在骨組織工程中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2000年03期

7 王天祥;鄒高峰;李超;翟孝雅;石昌艷;;CGF中VEGF、TGF-β1含量測定及其對軟組織創(chuàng)傷愈合影響的實驗研究[J];中外醫(yī)學(xué)研究;2013年10期

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1 黃嵐峰,孫樹東,齊欣,劉建國,徐莘香;成骨誘導(dǎo):兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)和功能特征[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2003年04期

2 郭立達(dá);夏冰;王捷;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向成骨誘導(dǎo)的動態(tài)觀察(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年16期

3 潘生才;唐毓金;謝克恭;藍(lán)常貢;盧賢哲;李曉峰;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化的超微結(jié)構(gòu)變化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年32期

4 王云;鮑小明;侯永新;李軍;張民;;去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨誘導(dǎo)[J];中國組織工程研究;2013年36期

5 趙大成;汪玉良;黨躍修;趙琳;汪靜;王翠芳;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨誘導(dǎo)[J];中國組織工程研究;2012年14期

6 單建林;許建中;周強(qiáng);王序全;朱灝;;微載體技術(shù)與普通方法成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的比較[J];中國臨床康復(fù);2006年41期

7 龔子龍;戴冀斌;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)以及成骨誘導(dǎo)[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2011年02期

8 王敏;孫新華;申玉芹;王景云;馮志遠(yuǎn);;人脂肪源性干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)過程中Ⅰ型膠原的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

9 史筱璐;段禮府;馬艷;畢曉娟;劉立中;;豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)[J];中國組織工程研究;2012年27期

10 郭勇;張西正;武繼民;李娜;趙紅斌;毛艷;;人骨形成蛋白2基因成骨誘導(dǎo)作用研究[J];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2006年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳實;范金柱;張金康;楊柳;孟國林;劉建;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成骨誘導(dǎo)過程中雌雄激素受體的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

2 楊東明;李明;張德文;覃佳強(qiáng);劉傳康;王忠良;劉星;曹豫江;南國新;瞿向陽;;hMSCs成骨誘導(dǎo)后免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究[A];中國西南地區(qū)第九屆小兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

3 楊東明;李明;張德文;覃佳強(qiáng);劉傳康;王忠良;劉星;曹豫江;南國新;瞿向陽;;hMSCs成骨誘導(dǎo)后免疫調(diào)節(jié)作用的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

4 王金武;陳欣;郭尚春;蔣海濤;黃敏;廖廣姍;楊順剛;趙慶輝;趙炳輝;朱曉明;;雙向誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外成骨與成血管的實驗研究[A];2011年第十一屆上海地區(qū)醫(yī)用生物材料研討會——生物材料與再生醫(yī)學(xué)進(jìn)展論文摘要匯編[C];2011年

5 劉偉;趙勁民;;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[A];第二十屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會、第二屆中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會骨傷科學(xué)術(shù)年會、第十九屆浙江省中西醫(yī)結(jié)合骨傷科專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

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1 陳亭;乳酸對羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和成骨誘導(dǎo)分化的影響[D];華東理工大學(xué);2011年

2 王慶德;體外低氧環(huán)境對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化影響的初步研究[D];華中科技大學(xué);2008年

3 梁文杰;豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 朱新煒;成骨誘導(dǎo)和移植途徑對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠骨損傷的影響[D];山東大學(xué);2014年

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1 狄婧;濃縮生長因子纖維蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及分化的影響[D];山東大學(xué);2015年

2 王云;去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨誘導(dǎo)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

3 單建林;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的微載體培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 康夏;microRNA-144/451簇在間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 楊森;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向成骨誘導(dǎo)復(fù)合異種松質(zhì)骨修復(fù)兔尺骨骨缺損的實驗研究[D];鄭州大學(xué);2014年

6 路繼業(yè);兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)下應(yīng)用于人工金屬體表面的成骨研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2004年

7 周倩;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞微載體懸浮培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)[D];華東理工大學(xué);2010年

8 廖慶輝;模擬微重力對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向成骨誘導(dǎo)分化的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

9 陳光興;成骨誘導(dǎo)的兔BMSCs體內(nèi)、外成骨特性的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 林慶杰;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)和成骨誘導(dǎo)[D];山東大學(xué);2005年

  本文關(guān)鍵詞：濃縮生長因子纖維蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：167031