本文選題：富血小板血漿　切入點(diǎn)：乳液電紡　出處：《上海交通大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）含有豐富的生長(zhǎng)因子，對(duì)多種組織具有再生和修復(fù)作用。通過(guò)構(gòu)建含PRP的納米纖維支架，實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)因子的緩釋效果，并研究其對(duì)軟骨再生的作用。 方法通過(guò)乳液電紡的方法構(gòu)建含PRP的納米纖維支架和PCL/GE支架，并對(duì)支架進(jìn)行力學(xué)、親水性、降解性等表征。通過(guò)ELISA法測(cè)定生長(zhǎng)因子的緩釋曲線。將兩種支架體外分別與BMSC共培養(yǎng)，通過(guò)SEM、CCK-8、免疫熒光、qPCR和Westernblot等方法研究支架對(duì)細(xì)胞的增殖、分化的影響。體內(nèi)將支架植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損區(qū)，并通過(guò)組織學(xué)、Micro-CT和IL-1β濃度檢測(cè)的方法對(duì)其修復(fù)軟骨缺損的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 結(jié)果PRP加入之后，，使PCL/GE納米纖維支架的力學(xué)參數(shù)與軟骨組織更為接近，同時(shí)具有良好的親水性和緩釋效果，三種生長(zhǎng)因子的緩釋時(shí)間達(dá)到一個(gè)月左右。體外實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞在含PRP支架上能良好生長(zhǎng)及增殖，且含PRP的支架在體外能對(duì)BMSC產(chǎn)生顯著的趨化效應(yīng)。通過(guò)免疫熒光法、qPCR、Western blot等方法，驗(yàn)證了含PRP支架可以有效促進(jìn)BMSC的體外成軟骨誘導(dǎo)分化和軟骨標(biāo)志物的表達(dá)，II型膠原、aggrecan、Sox9的合成均被上調(diào)；I型膠原的表達(dá)下降。缺損區(qū)植入含PRP支架的關(guān)節(jié)，軟骨細(xì)胞有明顯再生，且軟骨細(xì)胞周圍可見(jiàn)軟骨基質(zhì)合成增加。 結(jié)論1.通過(guò)乳液電紡的方法能夠得到結(jié)構(gòu)穩(wěn)定均一的含PRP納米纖維支架，其特點(diǎn)為親水性好，力學(xué)參數(shù)與軟骨組織接近；支架中生長(zhǎng)因子的緩釋期近一個(gè)月。2.與PCL/GE支架相比，含PRP的納米纖維支架可以促進(jìn)細(xì)胞的粘附、增殖、趨化，并可以促進(jìn)干細(xì)胞的成軟骨分化和軟骨標(biāo)志物的表達(dá)。3.含PRP納米纖維支架能夠在體內(nèi)有效促進(jìn)軟骨缺損的修復(fù)。其效果接近于正常軟骨組織。這可能與納米纖維支架自身的三維結(jié)構(gòu)，以及PRP中的多種生長(zhǎng)因子有關(guān)。
[Abstract]:Objective the platelet-rich plasma-rich plasma-rich platelet-rich plasma-rich plasma-rich platelet-rich plasma-rich plasma-rich plasma-rich platelet-rich plasma-rich plasma-rich plasma-rich platelet-rich plasma-rich plasma-rich plasma-rich plasma has rich growth factors, which can regenerate and repair many kinds of tissues. Methods Nano-fiber scaffolds and PCL/GE scaffolds containing PRP were constructed by emulsion electrospinning, and the scaffolds were mechanical and hydrophilic. Biodegradability and other characterization. The sustained release curves of growth factor were measured by ELISA method. The two scaffolds were co-cultured with BMSC in vitro. The proliferation of the scaffolds was studied by means of SEMCCK-8, immunofluorescence qPCR and Westernblot. In vivo, the scaffold was implanted into the cartilage defect area of rabbit knee joint, and the effect of repairing cartilage defect was evaluated by microCT and IL-1 尾. Results after the addition of PRP, the mechanical parameters of PCL/GE nanofiber scaffolds were closer to those of cartilage tissue, and had good hydrophilicity and sustained release effect. Cells could grow and proliferate well on PRP scaffolds, and PRP scaffolds could produce significant chemotactic effect on BMSC in vitro. It was proved that PRP scaffolds could effectively promote the chondrogenic differentiation of BMSC in vitro and the expression of cartilage markers. The synthesis of type II collagen aggrecann Sox9 was up-regulated, and the expression of type I collagen was down-regulated. The joints with PRP stents were implanted in the defect area. Chondrocytes were regenerated obviously and cartilage matrix synthesis was increased around chondrocytes. Conclusion 1. Stable and homogeneous scaffolds containing PRP nanofibers can be obtained by emulsion electrospinning, which are characterized by good hydrophilicity and close mechanical parameters to cartilage tissue, and the sustained release period of growth factor in the scaffold is nearly one month .2.Compared with that of PCL/GE scaffold. Nanofiber scaffolds containing PRP can promote cell adhesion, proliferation and chemotaxis. It can promote the cartilage differentiation of stem cells and the expression of cartilage markers. 3. The scaffold containing PRP nanofiber can effectively promote the repair of cartilage defect in vivo. The effect is close to that of normal cartilage tissue. This may be similar to that of nano-fiber. The three-dimensional structure of the scaffold itself, And various growth factors in PRP.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R687;R318.08

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1624482