發(fā)布時(shí)間：2018-02-20 16:31

  本文關(guān)鍵詞： 復(fù)合組織 深低溫冷凍 冷凍方法 內(nèi)皮細(xì)胞活性　出處：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 因復(fù)合組織的冷凍存在快速冷凍方法與慢速冷凍方法的爭(zhēng)議，所以本實(shí)驗(yàn)從這兩種冷凍方法對(duì)復(fù)合組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響方面，找到使血管在深低溫的冷凍中損傷較小的方法，從而提高斷肢（指）冷凍保存后再植手術(shù)的成功率。為臨床的斷肢（指）等復(fù)合組織的保存及修復(fù)尋找理論基礎(chǔ)。 方法 將35只新西蘭大白兔隨機(jī)分為對(duì)照組、快速冷凍12H、快速冷凍3d、快速冷凍7d、慢速冷凍12H、慢速冷凍3d、慢速冷凍7d組，每組5只。①對(duì)照組將截?cái)嗟拇蟀淄?0只后肢直接用10%的福爾馬林容易固定；快速冷凍12小時(shí)、3天、7天組大白兔取后肢每組各10只后肢，直接放入液氮中實(shí)行快速冷凍；慢速冷凍組的12小時(shí)、3天、7天組大白兔取后肢每組各10只后肢經(jīng)慢速冷凍后再投入到液氮中，依次保存12小時(shí)、3天、7天。所有冷凍組均經(jīng)37℃水浴快速?gòu)?fù)溫。所有快速?gòu)?fù)溫后的新西蘭大白兔后肢均經(jīng)10%的福爾馬林溶液固定。取后肢膝關(guān)節(jié)至距截肢斷端約1cm長(zhǎng)度的股動(dòng)脈血管行HE染色行光鏡及免疫組化檢查各組血管內(nèi)皮的病理變化。②對(duì)照組大白兔10只前肢取腋動(dòng)脈約1cm行生物測(cè)氧儀測(cè)定耗氧量；將快速冷凍及慢速冷凍各組大白兔前肢（每組各10只）經(jīng)同后肢同樣冷凍處理后行37℃快速水浴復(fù)溫，取大白兔10只前肢取腋動(dòng)脈約1cm行生物測(cè)氧儀測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組耗氧量。 結(jié)果 ①鏡觀察對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞較少脫落，各組血管內(nèi)皮細(xì)胞均有不同程度的脫落損傷，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)各組均與對(duì)照組存在顯著性差異（P0.05）；但是實(shí)驗(yàn)組各組間沒(méi)有顯著性差異（P0.05）; ②隨著投入液氮后的冷凍時(shí)間的增長(zhǎng)，不會(huì)加重對(duì)血管損傷； ③免疫組化檢測(cè)中,兩種冷凍方法血管內(nèi)皮中均可見(jiàn)血管生長(zhǎng)因子呈斑片狀的弱表達(dá)，與快速冷凍組相比，慢速冷凍組血管活性因子的表達(dá)更接近對(duì)照組，慢速冷凍組明顯高于快速冷凍組（P0.05）。 ④耗氧量的測(cè)量結(jié)果示：保存12h、3d的慢速冷凍與快速冷凍之間的耗氧量有顯著差異（P0.05）。但是慢速冷凍12h、3d組間無(wú)差異（P0.05）；快速冷凍12h組、3d組之間也沒(méi)有差異（P0.05）。 結(jié)論 1.復(fù)合組織經(jīng)冷凍及復(fù)溫后血管內(nèi)皮不同程度損傷； 2.與快速冷凍方法相比，慢速冷凍法對(duì)復(fù)合組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞影響更少，能更好的保存復(fù)合組織中的血管活性。 3.隨著投入液氮后的冷凍時(shí)間的增長(zhǎng)，兩種冷凍方法均不會(huì)加重對(duì)血管損傷；
[Abstract]:objective
Because of the existence of composite tissue freezing quick freezing method and slow freezing method of the dispute, so the effect from the two kinds of composite tissue cryopreservation methods on vascular endothelial cells, to find a way to make small vessels in deep hypothermia frozen injury in limb (finger), so as to improve the success rate of replantation after cryopreservation for the clinical limb (finger) preservation and restoration composite organization to find theoretical basis.
Method
35 New Zealand white rabbits were randomly divided into control group, rapid freezing 12H, quick freezing 3D, quick freezing and slow freezing of 7D, 12H, 3D and slow freezing and slow freezing, 7d group, 5 rats in each group. The control group will cut a total of 10 rabbits with 10% hind Faure Marin easily fixed; frozen 12 hours 3 days, 7 days, the rabbits were hindlimb 10 each hindlimb, directly into the implementation of rapid freezing in liquid nitrogen; slow freezing group 12 hours, 3 days, 7 days of rabbit hindlimb group with 10 rats in each group by hind slow freezing and then into liquid nitrogen, followed by 12 hours of storage for 3 days the 7 day, all groups were frozen. By 37 DEG C water bath rapid rewarming. All rapid rewarming after New Zealand rabbits hind was confirmed by Faure Marin solution 10%. HE fixed femoral artery and posterior knee joint to about 1cm length of amputation stump staining by light microscopy and immunohistochemical examination of blood The pathological changes of endothelium. In the control group, 10 rabbits were taken for forelimb axillary artery about 1cm biological oxygen measuring instrument for determination of oxygen consumption; rapid freezing and slow freezing of each rabbit forelimb (n = 10) with the same freezing treatment by hindlimb was performed in 37 DEG C water bath rapid rewarming, large white rabbits 10 take about 1cm for forelimb axillary artery biological oxygen measuring instrument of oxygen consumption.
Result
(1) the endothelial cells in the control group were less shedding than those in the control group. There were different degrees of shedding injury in each group. After statistical analysis, there was a significant difference between the experimental groups and the control group (P0.05), but there was no significant difference between the experimental group and the control group (P0.05).
(2) the increase of freezing time after the input of liquid nitrogen does not aggravate the damage to blood vessels.
(3) immunohistochemical staining showed that there were plaque like weak expression in vascular endothelial cells of two cryopreservation methods. Compared with the fast freezing group, the expression of vasoactive factors in the slow freezing group was closer to that in the control group, and the slow freezing group was significantly higher than that in the fast freezing group (P0.05).
(4) measurement of oxygen consumption showed that there was a significant difference in oxygen consumption between slow freezing and rapid freezing of 12h, 3D (P0.05). However, there was no difference between slow freezing 12h and 3D groups (P0.05), but there was no difference between fast freezing 12h group and 3D group (P0.05).
conclusion
1. the vascular endothelial cells were damaged in different degrees after freezing and rewarming.
2. compared with the rapid freezing method, the slow freezing method has less effect on the vascular endothelial cells in the composite tissue, and can better preserve the vasoactivity in the composite tissue.
3. with the increase of freezing time after the input of liquid nitrogen, the two cryopreservation methods did not aggravate the damage to blood vessels.

【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R318.52

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本文編號(hào)：1519443