本文關(guān)鍵詞：幾種氨基糖對(duì)受損心肌細(xì)胞和心肌組織的保護(hù)作用　出處：《中國(guó)海洋大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：心臟病(heart disease)不論從形成機(jī)理還是從危害程度上分類,其對(duì)心臟的最基本傷害均是引起不同程度的心肌細(xì)胞損傷。 殼聚糖是甲殼素脫乙酰后得到的高分子氨基多糖,具有良好的相容性、生物功能性、安全性和可降解性,被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域。隨著殼聚糖改性修飾的深入和在醫(yī)藥、生物技術(shù)領(lǐng)域研究的深入,低分子量殼聚糖衍生物的功能性和安全性評(píng)價(jià)成為一個(gè)重要的研究?jī)?nèi)容。 硫酸軟骨素是一種糖胺聚糖,易溶于水,對(duì)維持細(xì)胞環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定和正常生理功能起到重要作用。長(zhǎng)時(shí)間用藥的經(jīng)驗(yàn)顯示大分子的硫酸軟骨素作用效果比較緩慢。將硫酸軟骨素降解得小分子硫酸軟骨素,對(duì)其進(jìn)行功能性評(píng)價(jià),比較其與大分子硫酸軟骨素的作用效果,具有重要的研究意義。 本課題以殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素為基本材料,通過酶降解法,純化得到低分子量殼聚糖衍生物和低分子量硫酸軟骨素,開展了理化性質(zhì)測(cè)定,在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平評(píng)價(jià)了殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素對(duì)受損心肌細(xì)胞和組織的保護(hù)作用,為殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素的進(jìn)一步開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)取得了以下幾個(gè)方面的成果和進(jìn)展： 1.將羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素純化后分別經(jīng)殼聚糖酶和硫酸軟骨素酶降解,制備了羧甲基殼寡糖、中分子硫酸軟骨素和小分子硫酸軟骨素。 2.對(duì)七種氨基糖(N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼聚糖、羧甲基殼寡糖、硫酸軟骨素)進(jìn)行理化性質(zhì)的測(cè)定。 3.采用顯微觀察法和MTT法,測(cè)定上述7種氨基糖對(duì)于正常H9c2心肌細(xì)胞的作用,表明7種氨基糖均無細(xì)胞毒性,且不同程度地促進(jìn)H9c2細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖,N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度均為50μg·mL-1,羧甲基殼聚糖的最佳作用濃度為100μg·mL-1,小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg·mL-1,為氨基糖的后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用提供了理論支持。 4.建立體外培養(yǎng)的H9c2心肌細(xì)胞損傷模型,評(píng)價(jià)7種氨基糖對(duì)受損心肌細(xì)胞的作用。通過顯微觀察法和MTT法結(jié)果顯示,7種糖對(duì)于受損心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用,其中小分子硫酸軟骨素和羧甲基殼寡糖促進(jìn)受損心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖的效果較為突出。小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg·mL-1,羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度為50μg·mL-1。 5.給予異丙腎上腺素復(fù)制大鼠心肌梗塞模型,在此基礎(chǔ)上評(píng)價(jià)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素對(duì)受損心肌的保護(hù)作用。給心肌損傷的大鼠灌胃高、中、低劑量的羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素,于連續(xù)灌胃7d和14d時(shí)取血,檢測(cè)、比較血清中心臟標(biāo)志酶(乳酸脫氫酶、肌酸激酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶)的含量,并制作組織切片進(jìn)行組織病理觀察。通過血清標(biāo)志酶的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素作用效果相近,同劑量的兩種糖進(jìn)行差異性分析,差異不顯著(P0.05)。在用糖劑量上,7d時(shí)中劑量組與高劑量組初步表現(xiàn)出用糖治療的優(yōu)越性(中劑量組、高劑量組與ISO損傷對(duì)照組比較,具有顯著性差異P0.01)；14d時(shí),高劑量組基本恢復(fù)正常(高劑量組與正常組進(jìn)行比較,差異不顯著P0.05)。組織切片觀察結(jié)果與血清標(biāo)志酶表現(xiàn)結(jié)果一致。證明了兩種糖能夠促進(jìn)受損心肌的修復(fù)。 6.給予異丙腎上腺素法復(fù)制大鼠心肌梗塞模型,評(píng)價(jià)不同分子量硫酸軟骨素對(duì)受損心肌的保護(hù)作用。血清標(biāo)志酶含量檢測(cè)結(jié)果表明,小分子硫酸軟骨素和中分子硫酸軟骨素能明顯促進(jìn)受損心肌的修復(fù),尤其是小分子硫酸軟骨素組作用效果最突出：將各給糖組與ISO損傷對(duì)照組進(jìn)行差異性比較,7d時(shí)小分子硫酸軟骨素組表現(xiàn)出顯著性差異(P0.05),14d和21d時(shí)小分子硫酸軟骨素組表現(xiàn)出極顯著性差異(P0.01)；21d時(shí)將各給糖組與正常組進(jìn)行比較,僅小分子硫酸軟骨素組表現(xiàn)差異不顯著(P0.05),說明21d時(shí)小分子硫酸軟骨素組基本恢復(fù)正常。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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