本文關(guān)鍵詞：磺酸化甲殼素和磺酸化殼聚糖的生物學(xué)功能和安全性研究

  更多相關(guān)文章： 磺酸化甲殼素 磺酸化殼聚糖 抗凝血 腫瘤細(xì)胞 生物安全性

【摘要】：目的:甲殼素、殼聚糖糖殘基上羥基能與含氧無(wú)機(jī)酸發(fā)生酯化反應(yīng),氨基上也可發(fā)生酯化反應(yīng)。在甲殼素、殼聚糖的眾多酯化反應(yīng)中，研究最多的是兩者的硫酸酯化反應(yīng)。酯化產(chǎn)物磺酸化甲殼素（S-CT）、磺酸化殼聚糖（S-CTS）具有良好的水溶性、成膜性、生物降解性等,在輕工業(yè)、食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。已有研究表明S-CT、S-CTS具有抗凝血、抗血栓、抗氧化、抗病毒、抗動(dòng)脈硬化、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性，但對(duì)其生物安全性評(píng)價(jià)甚少。本論文通過(guò)磺化反應(yīng)分別合成S-CT、S-CTS,旨在研究S-CT、S-CTS的生物安全性，探討其抗凝效果，對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）體外生長(zhǎng)影響，以及對(duì)人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞SGC-7901體外生長(zhǎng)的影響,為S-CT、S-CTS安全性應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、通過(guò)甲殼素/殼聚糖的羥基（尤其是C6-OH）與磺化劑（氯磺酸/濃硫酸混酸）發(fā)生低溫非均相酯化反應(yīng)合成磺酸化甲殼素（S-CT）/磺酸化殼聚糖（S-CTS）。分別對(duì)S-CT、S-CTS進(jìn)行純化及理化性質(zhì)測(cè)定。 2、通過(guò)兔皮內(nèi)刺激反應(yīng)，評(píng)價(jià)兩種材料對(duì)機(jī)體的短期刺激反應(yīng)強(qiáng)度；以膠體、膜片為載體，分別評(píng)價(jià)兩種材料的皮下、肌肉組織相容性及體內(nèi)降解性；通過(guò)溶血率測(cè)定，評(píng)價(jià)兩種材料的血液相容性。 3、通過(guò)全血凝血試驗(yàn)研究S-CT、S-CTS體外抗凝血功能，，在細(xì)胞水平，采用顯微觀察結(jié)合MTT法評(píng)價(jià)S-CT、S-CTS對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC、人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人喉表皮樣癌HEp-2細(xì)胞以及人胃癌細(xì)胞SGC-7901體外生長(zhǎng)的作用 結(jié)果： 1、紅外圖譜顯示兩種材料均發(fā)生磺化取代，測(cè)定兩者均具有較高取代度。 2、兩種材料皮內(nèi)刺激反應(yīng)結(jié)果均符合國(guó)家要求，表現(xiàn)出良好的血液相容性。膠體在體內(nèi)降解極快，炎癥反應(yīng)極輕微。膜片在體內(nèi)呈線性速率降解，炎癥反應(yīng)隨時(shí)間逐漸減輕，兩種材料整體表現(xiàn)出良好的生物組織相容性以及體內(nèi)降解性。 3、S-CT、S-CTS在2.5-10mg/mL濃度范圍內(nèi)，均具有明顯的抗凝作用，其中S-CTS的抗凝效果優(yōu)于S-CT。兩種材料在125-250μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）體外生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，其中以250mg/mLS-CT,作用2d，促進(jìn)效果最為顯著。兩種材料在62.5-1000μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)、人喉表皮樣癌細(xì)胞（HEp-2）、人胃癌細(xì)胞（SGC-7901）的體外增殖都有顯著抑制作用，S-CT對(duì)三種癌細(xì)胞最大抑制率分別可達(dá)到48.52%（6d）、35.73%（6d）、57.43%（6d），S-CTS對(duì)三種癌細(xì)胞最大抑制率分別可達(dá)到65.23%（6d）、43.19%（6d）、44.32%（4d），并且基本遵循抑制率隨著作用時(shí)間的增加、濃度的增加而增加這個(gè)趨勢(shì)，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。 結(jié)論：兩種材料均具有良好的生物相容性，體內(nèi)降解性良好，各項(xiàng)指標(biāo)均符合國(guó)家對(duì)安全性實(shí)驗(yàn)的要求。在生物學(xué)功能方面，表現(xiàn)為抗凝效果顯著；對(duì)正常人臍血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）體外生長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用；對(duì)腫瘤細(xì)胞：HeLa細(xì)胞、HEp-2細(xì)胞、SGC-7901細(xì)胞體外生長(zhǎng)有明顯抑制作用，為兩種材料的進(jìn)一步生物學(xué)功能的研究以及今后可能的運(yùn)用提供一定依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：磺酸化甲殼素 磺酸化殼聚糖 抗凝血 腫瘤細(xì)胞 生物安全性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 目錄11-16
• 第一章 引言16-34
• 1 甲殼素/殼聚糖理化性質(zhì)概述16-18
• 1.1 甲殼素理化性質(zhì)16-17
• 1.2 殼聚糖的理化性質(zhì)17-18
• 2 甲殼素/殼聚糖的改性18-24
• 2.1 酰化反應(yīng)18-19
• 2.2 酯化反應(yīng)19-20
• 2.2.1 硫酸酯19
• 2.2.2 黃原酸酯19-20
• 2.2.3 磷酸酯20
• 2.2.4 硝酸酯20
• 2.3 醚化反應(yīng)20-21
• 2.4 西佛堿反應(yīng)21
• 2.5 烷基化反應(yīng)21-22
• 2.6 季銨化反應(yīng)22
• 2.7 氧化反應(yīng)22-23
• 2.8 水解反應(yīng)23
• 2.9 接枝共聚反應(yīng)23-24
• 2.10 交聯(lián)反應(yīng)24
• 3 甲殼素/殼聚糖及其衍生物的應(yīng)用24-28
• 3.1 在食品工業(yè)中的應(yīng)用24-25
• 3.2 在輕紡工業(yè)中的應(yīng)用25-26
• 3.3 在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用26
• 3.4 在醫(yī)藥衛(wèi)生方面的應(yīng)用26-28
• 4 甲殼素、殼聚糖硫酸酯概述28-32
• 4.1 甲殼素、殼聚糖硫酸酯制備方法28-29
• 4.1.1 磺化體系選擇28-29
• 4.1.2 經(jīng)磺化劑預(yù)處理后的殼聚糖29
• 4.2 甲殼素、殼聚糖硫酸酯的生物活性29-32
• 4.2.1 抗凝血活性29-31
• 4.2.2 抗血栓活性31
• 4.2.3 抗氧化活性31
• 4.2.4 抗病毒活性31-32
• 4.2.5 抗腫瘤活性32
• 5 立題依據(jù)32-34
• 第二章 S-CT、S-CTS 材料合成純化及理化性質(zhì)測(cè)定34-41
• 1 材料、試劑與儀器34-35
• 1.1 材料與主要試劑34
• 1.2 主要儀器34-35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 2.1 S-CTS 、S-CT 材料合成及純化35-36
• 2.2 S-CT、S-CTS 理化性質(zhì)測(cè)定36-38
• 2.2.1 S-CT、S-CTS 水分測(cè)定36
• 2.2.2 S-CT、S-CTS 灰分測(cè)定36
• 2.2.3 pH 值測(cè)定36
• 2.2.4 等電點(diǎn)測(cè)定36-37
• 2.2.5 旋轉(zhuǎn)黏度測(cè)定37
• 2.2.6 取代度測(cè)定37
• 2.2.7 脫乙酰度測(cè)定37-38
• 2.2.8 紅外光譜38
• 2.2.9 分子量測(cè)定38
• 3 結(jié)果與討論38-40
• 3.1 S-CT、S-CTS 主要理化性質(zhì)38-39
• 3.2 紅外光譜39-40
• 4 本章小結(jié)40-41
• 第三章 S-CT、S-CTS 的生物相容性和生物降解性評(píng)價(jià)41-57
• 1 材料、試劑與儀器41-42
• 1.1 材料與主要試劑41-42
• 1.2 主要儀器42
• 2 實(shí)驗(yàn)方法42-45
• 2.1 溶血率測(cè)定42-43
• 2.2 兔皮內(nèi)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)43
• 2.3 S-CT、S-CTS 膠體組織相容性43-44
• 2.4 S-CT、S-CTS 膜片組織相容性44
• 2.5 組織切片44-45
• 2.6 HE 染色45
• 3 結(jié)果與討論45-56
• 3.1 溶血率測(cè)定45-46
• 3.2 皮內(nèi)刺激反應(yīng)46
• 3.3 膠體溶液組織相容性46-50
• 3.4 膜片組織相容性50-56
• 4 本章小結(jié)56-57
• 第四章 S-CT、S-CTS 的生物學(xué)功能57-79
• 1 材料、試劑與儀器57-58
• 1.1 材料與主要試劑57-58
• 1.2 主要儀器58
• 2 實(shí)驗(yàn)方法58-62
• 2.1 全血凝血時(shí)間測(cè)定58
• 2.2 對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC 生長(zhǎng)的影響58-59
• 2.3 對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用59-62
• 2.3.1 對(duì)人宮頸癌細(xì)胞 HeLa 生長(zhǎng)的抑制作用59-60
• 2.3.2 對(duì)人喉表皮樣癌細(xì)胞 HEp-2 生長(zhǎng)的抑制作用60-61
• 2.3.3 對(duì)人胃癌細(xì)胞 SGC-7901 生長(zhǎng)的抑制作用61-62
• 3 結(jié)果及分析62-77
• 3.0 全血凝血時(shí)間測(cè)定62-63
• 3.1 對(duì) HUVEC 細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用63-65
• 3.2 對(duì) HeLa 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用65-69
• 3.3 對(duì) HEp-2 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用69-73
• 3.4 對(duì) SGC-7901 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用73-77
• 4 本章小結(jié)77-79
• 全文總結(jié)79
• 結(jié)論79-80
• 論文的創(chuàng)新點(diǎn)80
• 論文存在的不足80-81
• 參考文獻(xiàn)81-88
• 致謝88
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷88
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文88-89

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本文編號(hào)：1086910