本文關(guān)鍵詞：人BMSCs體外復(fù)合自體DBM構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與自體脫鈣松質(zhì)骨基質(zhì)(DBM)體外復(fù)合,構(gòu)建組織工程軟骨的可行性。 方法：1、術(shù)中獲取股骨頭,利用不離心的全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離人BMSCs,進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察選用第3代細(xì)胞,MTT法繪制生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞儀鑒定人BMSCs。2、第3代人BMSCs,利用高密度微團(tuán)誘導(dǎo)培養(yǎng)法進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo)。21天后固定標(biāo)本,進(jìn)行病理組織學(xué)染色,觀察糖胺多糖和Ⅱ型膠原的表達(dá)來(lái)檢測(cè)人BMSCs的成軟骨誘導(dǎo)能力。3、術(shù)中獲取股骨頭,利用改良Urist法制成DBM,通過(guò)電鏡觀察和降解率等性能測(cè)定。將DBM與人BMSCs體外復(fù)合后分為2組(n=36)。實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng),對(duì)照組不進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo)。4、細(xì)胞支架復(fù)合物于第1、2、3個(gè)月取材行大體、電鏡形態(tài)學(xué)觀察、H-E、阿利新藍(lán)及Ⅱ型膠原免疫組化染色,利用IPP軟件行Ⅱ型膠原免疫組化IOD值測(cè)定并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：1、不離心全骨髓貼壁培養(yǎng)獲取的細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭狀,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示最佳接種濃度為5×104/ml。流式細(xì)胞儀測(cè)得細(xì)胞表面高表達(dá)CD29、CD44和CD105,低表達(dá)CD34和CD45。標(biāo)本誘導(dǎo)后進(jìn)行阿利新藍(lán)染色示胞質(zhì)中藍(lán)染,提示有糖胺多糖表達(dá)；Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化示細(xì)胞外基質(zhì)中可見(jiàn)棕褐色,提示Ⅱ型膠原表達(dá)。2、DBM呈立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),孔徑約340μ m,約12周能基本降解完全。電鏡觀察顯示隨著DBM降解,細(xì)胞處于生長(zhǎng)分化的動(dòng)態(tài)過(guò)程。3、兩組細(xì)胞支架復(fù)合物病理組織學(xué)染色對(duì)比,實(shí)驗(yàn)組阿利新藍(lán)染色、Ⅱ型膠原免疫組化呈陽(yáng)性表達(dá)。Ⅱ型膠原免疫組化IOD值統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明,第3個(gè)月,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Ⅱ型膠原的表達(dá)有差異；實(shí)驗(yàn)組內(nèi)第3個(gè)月與前兩個(gè)月比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明Ⅱ型膠原的表達(dá)存在差異。 結(jié)論：1、第3代人BMSCs適合作為軟骨組織工程的種子細(xì)胞。2、人BMSCs與自體DBM體外復(fù)合后進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo),具備一定的組織工程軟骨特性。全文圖45幅,表2個(gè),參考文獻(xiàn)73篇。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 BMSCs DBM 成軟骨誘導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• ~.略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一章 人BMSCs的分離培養(yǎng)及鑒定12-30
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料來(lái)源與知情同意12
• 1.1.2 主要試劑12-13
• 1.1.3 主要儀器和物品13-14
• 1.1.4 主要液體的配制14-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 1.2.1 人BMSCs的分離培養(yǎng)15-16
• 1.2.2 人BMSCs的培養(yǎng)及傳代16
• 1.2.3 人BMSCs的生長(zhǎng)曲線繪制16-17
• 1.2.4 人BMSCs的凍存與復(fù)蘇17
• 1.2.5 人BMSCs形態(tài)學(xué)觀察17
• 1.2.6 流式細(xì)胞儀人BMSCs表型鑒定17-18
• 1.2.7 人BMSCs成軟骨誘導(dǎo)分化18-19
• 1.2.8 人BMSCs成軟骨誘導(dǎo)分化后染色19-20
• 1.3 結(jié)果20-26
• 1.3.1 人BMSCs的分離培養(yǎng)20-21
• 1.3.2 人BMSCs的培養(yǎng)及傳代21-22
• 1.3.3 人BMSCs的生長(zhǎng)曲線繪制22-23
• 1.3.4 流式細(xì)胞儀人BMSCs表型鑒定23-25
• 1.3.5 人BMSCs成軟骨誘導(dǎo)分化后染色25-26
• 1.4 討論26-29
• 1.4.1 種子細(xì)胞的選擇26
• 1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法的選擇與改良26-27
• 1.4.3 年齡對(duì)細(xì)胞的影響27
• 1.4.4 種子細(xì)胞的鑒定27-28
• 1.4.5 成軟骨誘導(dǎo)方法28-29
• 1.5 結(jié)論29-30
• 第二章 人BMSCs體外復(fù)合DBM構(gòu)建組織工程軟骨30-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料30-32
• 2.1.1 主要試劑30
• 2.1.2 主要儀器和物品30-31
• 2.1.3 主要液體的配制31-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法32-35
• 2.2.1 DBM的制作過(guò)程32
• 2.2.2 DBM的降解率測(cè)定32
• 2.2.3 人BMSCs體外復(fù)合DBM制作細(xì)胞支架復(fù)合物32-33
• 2.2.4 細(xì)胞支架復(fù)合物的分組33
• 2.2.5 細(xì)胞支架復(fù)合物電鏡掃描33
• 2.2.6 細(xì)胞支架復(fù)合物組織學(xué)染色33-35
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理35
• 2.3 結(jié)果35-42
• 2.3.1 DBM的大體觀察情況35
• 2.3.2 DBM降解率測(cè)定35-36
• 2.3.3 細(xì)胞支架復(fù)合物的掃描電鏡觀察情況36-37
• 2.3.4 標(biāo)本病理組織學(xué)檢測(cè)37-41
• 2.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果41-42
• 2.4 討論42-44
• 2.4.1 人BMSCs體外復(fù)合DBM的成軟骨誘導(dǎo)基礎(chǔ)42-43
• 2.4.2 不同時(shí)相點(diǎn)兩組成軟骨差異性表達(dá)的探討43-44
• 2.5 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 附錄61-63
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果目錄63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1086194