本文關鍵詞：大鼠帶瓣血管液氮凍存時間對其活性和組織中IGF-I水平的影響

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【摘要】：目的：觀察、檢測經(jīng)液氮凍存不同時間大鼠帶瓣血管的大體標本、管壁結構和細胞代謝情況及其組織中IGF-Ⅰ的分布和含量,研究帶瓣管道的活性與IGF-Ⅰ之間的關系,提供一種評價帶瓣管道活性的新思路。 方法：健康成年wistar大鼠60只,雌雄不限,體重150至250g,隨機分為3組：空白對照組20只(A組),液氮凍存標本1個月20只(B組),液氮凍存標本3個月20只(C組)。采用腹腔內注射濃度為10%的水合氯醛麻醉,消毒并用無菌操作直接開胸取帶瓣主動脈。將3組帶瓣血管植入含有頭孢西丁鈉、林可霉素、兩性霉素B、多粘菌素及萬古霉素的M199培養(yǎng)基中37℃水浴6h。A組置入含含10%胎牛血清的M199培養(yǎng)基中孵育24h,計算檢測其糖代謝率,B、C組經(jīng)滅菌后置入含有10%胎牛血清和10%二甲基亞楓的M199培養(yǎng)基的凍存管中密封,經(jīng)控制性階段降溫后分別置于-196℃液氮中凍存1個月、3個月。B、C組凍存結束后取出,放置于37℃水浴箱中快速升溫后亦檢測糖代謝率。3組標本經(jīng)福爾馬林固定后,石蠟包埋、切片,行HE染色和二步法免疫組化試劑盒染色,分別觀察、統(tǒng)計各組標本的組織結構和細胞IGF-Ⅰ陽性染色。 結果：1、大體標本外觀及形態(tài)：肉眼見3組帶瓣大動脈均無潰爛、衰敗及鈣化灶,B、C兩組帶瓣主動脈的大體外觀、形態(tài)無明顯差異,而顏色較A組略微灰白。 2、葡萄糖代謝率：A組為3.812±0.4768mmol/L·24h,B組3.826±0.3495mmol/L.24hC組3.655±0.3736mmol/L.24h,3組數(shù)據(jù)之間比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。 3、組織結構：顯微鏡下觀察A組標本病理切片可見管腔內被覆平整的單層扁平內皮細胞,胞核清晰,管壁中層有多層完整平滑肌細胞,胞外基質排列整齊,另見少許成纖維細胞。B組可見管腔一側內皮細胞排列較為緊密、平整,中層血管平滑肌細胞輪廓清晰,排列整齊。C組可見管腔面內皮細胞輪廓清晰,無明顯脫落,中層血管平滑肌細胞完整,較A組稍顯疏松,未見排列紊亂及斷裂現(xiàn)象。 4、免疫組化染色：3組標本均觀察到較強陽性染色,可于細胞胞質中觀察到深淺不等的棕黃色著色�！申栃匀旧毎嗉蟹植加诠鼙谥袑拥钠交〖毎筒糠殖衫w維細胞,內皮細胞亦可見染色。陽性率分別為：A組35%,B組30%,C組30%,3組數(shù)據(jù)之間比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。 結論：1、本實驗采用目前主流的帶瓣管道制備和保存方法可以在短時期內較好的保留組織和細胞的活性。 2、IGF-Ⅰ在帶瓣主動脈中的內皮細胞、平滑肌細胞及成纖維細胞均有一定比例的陽性染色,提示其在為保留帶瓣管道活性所發(fā)揮的作用方面有明確的細胞學證據(jù)。 3、由本實驗的結果及IGF-Ⅰ的生物學作用,推測該分子可以作為評估帶瓣管道活性的新指標,也為更為長久的保存帶瓣管道活性提供了一條新思路。
【關鍵詞】：帶瓣管道 血管活性 IGF-I
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.52
【目錄】：

• 主要英文縮寫4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10
• 材料和方法10-17
• 結果17-20
• 討論20-33
• 結論33-34
• 參考文獻34-43
• 綜述43-67
• 參考文獻55-67
• 致謝67-68
• 研究生階段發(fā)表論文68

【參考文獻】

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本文編號：1012443