目的：載脂蛋白F（apolipoprotein F，ApoF）是近些年發(fā)現(xiàn)的載脂蛋白，其血漿濃度與血脂異常密切相關(guān)，本課題主要是深入研究ETS和C/EBP調(diào)控載脂蛋白F基因表達(dá)的機(jī)制。 方法：1.將ApoF啟動(dòng)子區(qū)構(gòu)建在PGL4載體上，2.通過pumbed基因數(shù)據(jù)庫設(shè)計(jì)本課題先前已預(yù)測的潛在轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)框，并通過基因合成的方法構(gòu)建相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)克隆3.啟動(dòng)子分別與轉(zhuǎn)錄因子及其相應(yīng)顯性失活突變體共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)4.電泳遷移率檢測和染色質(zhì)免疫共沉淀從體內(nèi)外驗(yàn)證反式作用因子和順式作用元件的直接相互作用5.通過westernblot及realtime PCR檢測人類不同組織來源細(xì)胞株的ApoF蛋白及mRNA表達(dá)水平6.通過westernblot檢測人類不同組織來源細(xì)胞株的C/EBPα、C/EBPβ蛋白表達(dá)水平7.轉(zhuǎn)錄因子特異性siRNA實(shí)驗(yàn)8.從蛋白水平檢測ETS-1、ETS-2、C/EBPα、ETS-1與C/EBPα、ETS-2與C/EBPα對ApoF是否具有促進(jìn)作用9.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)錄因子之間的相互作用。 結(jié)果：1.成功構(gòu)建PGL4-ApoF198熒光報(bào)告基因2.將C/EBP及HNF3...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
材料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 試劑配方
附錄三 主要儀器設(shè)備
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3901865