本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌27000抗原的克隆、表達(dá)　出處：《安徽理工大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的克隆結(jié)核分枝桿菌(MTB)LprG基因,并在大腸桿菌中重組表達(dá)MTB27 000抗原,為進(jìn)一步研究其在結(jié)核病診斷中的價(jià)值奠定基礎(chǔ)。 方法培養(yǎng)MTB菌株并提取其基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)從MTB基因組中擴(kuò)增出LprG基因,將目的片段純化回收后,克隆到pEASYT1Simple載體中,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌E.coli DH5α中,取陽(yáng)性重組質(zhì)粒經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切鑒定后再進(jìn)行測(cè)序分析。用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、HindⅢ從重組質(zhì)粒pEASY T1Simple-LprG中切下LprG基因,并插入到經(jīng)同樣雙酶切的表達(dá)載體pET28a(+)中,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌Ecoli DH5α中,提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定。將重組表達(dá)載體pET28a(+)-LprG轉(zhuǎn)化入Ecoli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),進(jìn)行SDS-PAGE分析、Western-blot鑒定及可溶性分析。 結(jié)果從MTB基因組中擴(kuò)增出711bp的LprG基因。測(cè)序結(jié)果顯示擴(kuò)增產(chǎn)物與GenBank中MTB H37Rv LprG基因序列一致。重組表達(dá)載體pET28a(+)-LprG經(jīng)雙酶切后,得到目的基因大小相同的兩個(gè)片段,表明重組表達(dá)載體構(gòu)建成功。攜帶有pET28a(+)-LprG的大腸桿菌E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,在27kDa處獲得目的蛋白,Western-blot分析該蛋白為所表達(dá)的目的蛋白�？扇苄苑治鲈摰鞍滓钥扇苄院桶w兩種形式共同存在,但主要以可溶性形式為主。 結(jié)論成功地克隆出MTB LprG基因;構(gòu)建了MTB 27 000抗原的重組表達(dá)載體pET28a(+)-LprG,并在大腸桿菌中獲得了高效表達(dá),為以后研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone the MTB27 gene of Mycobacterium tuberculosis and express MTB27 000 antigen in Escherichia coli, so as to lay a foundation for the further study of its value in the diagnosis of tuberculosis. Methods MTB strain was cultured and its genome DNA was extracted. The LprG gene was amplified from the MTB genome by polymerase chain reaction (PCR), and the target fragment was purified and recovered. The recombinant plasmid was cloned into E. coli DH5 偽 and transformed into E. coli DH5 偽. The recombinant plasmid was digested with restriction endonuclease (EcoR 鈪，

本文編號(hào)：1367074