發(fā)布時(shí)間：2017-08-19 07:01

  本文關(guān)鍵詞：IL-1β單克隆抗體在癲癇治療中的價(jià)值

  更多相關(guān)文章： 癲癇 白介素-1β 白介素-1β單克隆抗體 NF-κB S100B 膠質(zhì)細(xì)胞 匹羅卡品

【摘要】：研究目的:癲癇是神經(jīng)科常見(jiàn)慢性疾病之一,其病理生理機(jī)制復(fù)雜。近年來(lái)癲癇與神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)及炎性介質(zhì)的關(guān)系已成為研究熱點(diǎn),受到廣泛關(guān)注。最新研究顯示,包括IL-1β在內(nèi)的多種炎性介質(zhì)在癲癇患者及癲癇動(dòng)物模型的腦組織中表達(dá)水平升高。深入研究發(fā)現(xiàn)IL-1β能提高神經(jīng)元興奮性、增加癇性發(fā)作可能性。本研究通過(guò)腹腔注射氯化鋰、匹羅卡品建立癲癇模型,探索能否通過(guò)腹腔IL-1β單克隆抗體中和癲癇持續(xù)狀態(tài)所導(dǎo)致IL-1β含量異常升高,觀察白介素1β(IL-1β)單克隆抗體對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導(dǎo)大鼠海馬組織炎癥反應(yīng)的影響。研究方法:72只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=20)、癲癇模型組(模型組,n=26)、IL-1β單抗抗體治療組(治療組,n=26)。模型組和治療組均采用氯化鋰-匹羅卡品建立癲癇模型,對(duì)照組以相同液體量的生理鹽水替代氯化鋰、匹羅卡品。當(dāng)模型組、治療組大鼠癇性發(fā)作達(dá)到Racine分級(jí)的IV-V級(jí)發(fā)作且持續(xù)1小時(shí)后,腹腔注射溴化甲基阿托品和地西泮解除癇性發(fā)作。治療組大鼠于癲癇發(fā)作30分鐘、7天及14天后分別給予IL-1β單克隆抗體1ml(20ug?ml)腹腔注射,模型組和對(duì)照組則給予等量的生理鹽水。模型組和治療組分別于造模后72h、21d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取3只提取海馬組織總蛋白,采用蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)用藥后72h、21d海馬組織中IL-1β單克隆抗體的含量。各組大鼠于造模后72h隨機(jī)取10只大鼠斷頭取腦、分離海馬組織和進(jìn)行腹主動(dòng)脈抽血,用RT-PCR檢測(cè)癇性發(fā)作72h后海馬組織中IL-1β、NF-κB mRNA表達(dá)水平,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清中S100B含量。各組于造模后21天,大鼠行心臟灌注固定,分離腦組織進(jìn)行冰凍切片,行免疫熒光法檢測(cè)海馬區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化情況及行尼氏染色檢測(cè)神經(jīng)元凋亡情況。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較IL-1β單克隆抗體對(duì)癲癇的干預(yù)是否有效。研究結(jié)果:1.在注射匹羅卡品10~40min后,模型組大鼠開(kāi)始出現(xiàn)排便排尿、口角流涎、雙眼充血等外周膽堿能反應(yīng);繼之出現(xiàn)面部抽動(dòng)、行動(dòng)刻板、平衡力下降、行走不穩(wěn)等表現(xiàn);最后出現(xiàn)癲癇發(fā)作的典型癥狀:陣發(fā)性出現(xiàn)咀嚼或牙關(guān)緊閉、頸項(xiàng)強(qiáng)直或全身肌肉僵硬、濕狗樣抖動(dòng)、四肢不自主抽搐或痙攣,最終出現(xiàn)全身強(qiáng)直-痙攣發(fā)作并失去平衡、跌倒。模型組造模成功率85.29%,死亡率10.34%(68只大鼠,58只成功建立癲癇模型,其中4只在注射匹羅卡品后24h內(nèi)死亡,2只在癲癇發(fā)作后48h內(nèi)死亡,10只未出現(xiàn)典型的癲癇發(fā)作)。2.模型組大鼠海馬組織中僅檢測(cè)到少量il-1β抗體,考慮與抗體的交叉反應(yīng)有關(guān),治療組中給藥72h(3.797±0.021)、21d(3.584±0.024)后大鼠海馬組織中il-1β單克隆抗體的濃度明顯高于模型組(1.278±0.019、1.351±0.010)。與標(biāo)準(zhǔn)濃度比較發(fā)現(xiàn)不同時(shí)間點(diǎn)治療組中il-1β單克隆抗體的濃度均3.00ugab/g。結(jié)果提示:il-1β單克隆抗體能夠通過(guò)血腦屏障并能保持有效治療濃度(3.00ugab/g)。3.模型組il-1β、nf-κb表達(dá)水平均高于對(duì)照組(均p0.01),治療組il-1β、nf-κb表達(dá)水平均低于模型組(均p0.01)。4.對(duì)照組血清中s100b蛋白水平較低,與模型組比較,治療組血清中s100b蛋白水平明顯下降(p0.01)。5.尼氏染色顯示對(duì)照組ca1區(qū)、ca3區(qū)錐體細(xì)胞、神經(jīng)元排列整齊,形態(tài)完整;模型組ca1區(qū)、ca3區(qū)有神經(jīng)元脫失及變形、膠質(zhì)細(xì)胞增生(與對(duì)照組比較,p0.05);與模型組比較,治療組大鼠海馬ca1區(qū)、ca3區(qū)錐體細(xì)胞、神經(jīng)元缺失情況顯著減輕(p0.01)。6.為進(jìn)一步探討il-1β單克隆抗體對(duì)于膠質(zhì)細(xì)胞增生的影響,觀察造模后第21天海馬區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞增生情況,利用膠質(zhì)纖維酸性蛋白(gfap)、iba1抗體進(jìn)行熒光雙標(biāo)。免疫熒光雙標(biāo)染色顯示,正常對(duì)照組大鼠海馬無(wú)膠質(zhì)細(xì)胞異常增生,se21天在海馬ca3區(qū)表現(xiàn)為gfap與iba1陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多,星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞增生現(xiàn)象顯著(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而治療組GFAP與Iba1陽(yáng)性細(xì)胞較模型組明顯減少(p0.01)。膠質(zhì)細(xì)胞活化情況顯著減輕(P0.01)。結(jié)論:(1)利用氯化鋰-匹羅卡品建立癲癇模型可誘導(dǎo)大鼠表現(xiàn)為典型的癲癇持續(xù)狀態(tài),模型大鼠進(jìn)入慢性期后,通過(guò)尼氏染色及免疫熒光染色觀察到海馬CA1、CA3區(qū)出現(xiàn)神經(jīng)元損傷、膠質(zhì)細(xì)胞增生等病理改變,這些病理改變符合人難治性癲癇的典型病理改變,同時(shí)氯化鋰-匹羅卡品模型的發(fā)作分期符合人類(lèi)癲癇的發(fā)病特點(diǎn)。另外該模型實(shí)驗(yàn)周期短、實(shí)驗(yàn)條件成熟、易操作。以上證據(jù)均提示氯化鋰-匹羅卡品癲癇動(dòng)物模型可以作為研究癲癇發(fā)病機(jī)制、治療方法等研究方向的重要選擇之一。(2)IL-1β是最強(qiáng)大的促炎因子之一,其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是組織炎癥反應(yīng)的開(kāi)始。IL-1β作為上游炎性因子能介導(dǎo)多種炎性因子表達(dá)上調(diào),繼而誘發(fā)下游的炎癥瀑布反應(yīng),NF-κB為細(xì)胞內(nèi)重要的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)之一,參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄,活化的NF-κB可促進(jìn)IL-1β基因轉(zhuǎn)錄。本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)RT-PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬組織中IL-1β、NF-κB mRNA轉(zhuǎn)錄水平,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:模型組IL-1β、NF-κB mRNA表達(dá)水平較正常組明顯上調(diào)(p0.05),提示癲癇誘導(dǎo)IL-1β、NF-kB mRNA轉(zhuǎn)錄、免疫炎性因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在SE中發(fā)揮重要作用。(3)S100B是血腦屏障滲漏和星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的標(biāo)志物,本實(shí)驗(yàn)證實(shí)在癲癇模型大鼠急性期血清中S100B水平明顯高于對(duì)照組,提示癲癇發(fā)作可能導(dǎo)致神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞損傷及血腦屏障破壞。通過(guò)腹腔注射IL-1β單克隆抗體,并檢測(cè)海馬組織中IL-1β單克隆抗體濃度發(fā)現(xiàn)其能有效通過(guò)血腦屏障。癲癇模型大鼠腹腔內(nèi)注射IL-1β單克隆抗體能降低血清中S100B水平及改善神經(jīng)元缺失、膠質(zhì)細(xì)胞活化,這提示IL-1β參與癲癇發(fā)作造成的血腦屏障破壞及腦損傷過(guò)程。(4)以癲癇發(fā)作誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)為靶點(diǎn)將可能成為未來(lái)癲癇治療的新方向。
【關(guān)鍵詞】：癲癇 白介素-1β 白介素-1β單克隆抗體 NF-κB S100B 膠質(zhì)細(xì)胞 匹羅卡品
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 1 對(duì)象和方法15-29
• 1.1 研究動(dòng)物15
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備15-16
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 1.4 主要溶液及試劑配方17-18
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法18-28
• 1.6 統(tǒng)計(jì)分析28-29
• 2 結(jié)果29-36
• 2.1 行為學(xué)觀察29
• 2.2 Western blot 檢測(cè)治療組海馬區(qū) IL-1β 單克隆抗體的濃度29-30
• 2.3 Real Time-PCR 檢測(cè)海馬組織 IL-1β、NF-κB m RNA 的表達(dá)30
• 2.4 ELISA 檢測(cè)各組大鼠血清中 S100B 含量30-31
• 2.5 免疫熒光雙重染色法觀察海馬區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化情況31-33
• 2.6 尼氏染色法觀察海馬區(qū)神經(jīng)元缺失情況33-36
• 3 討論36-42
• 3.1 癲癇模型選擇36-37
• 3.2 癲癇與炎癥反應(yīng)的關(guān)系37-39
• 3.3 癲癇與血腦屏障的關(guān)系..39-42
• 4 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明48-49
• 綜述 癲癇與細(xì)胞因子49-62
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 余年;狄晴;;炎性反應(yīng)與癲癇[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2009年04期

2 周力軍;王雷;袁良津;;236例癥狀性癲癇病因分析[J];安徽醫(yī)學(xué);2013年08期

3 別畢洲;王東軍;;VNS在抗癲癇治療中的免疫調(diào)節(jié)作用[J];海南醫(yī)學(xué);2010年17期

4 胡勇;狄晴;;白介素-1和白介素-6與癲vN及其認(rèn)知功能障礙的關(guān)系[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2009年06期

5 趙國(guó)梁;丁明;;血清NSE、S100β和Aβ蛋白與老年患者術(shù)后認(rèn)知功能障礙關(guān)系的臨床研究[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2013年10期

6 陳亮;江琳;;癲癇患者院前發(fā)作致意外傷及相關(guān)因素調(diào)查[J];護(hù)理學(xué)雜志;2014年07期

7 廖進(jìn);梁曉陽(yáng);陳禮剛;;創(chuàng)傷性癲癇的治療進(jìn)展[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年02期

8 黎興鍵;吳智兵;于征淼;張小梅;;黃連解毒湯合定癇丸治療陽(yáng)癇大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J];河北中醫(yī);2014年09期

9 孫宏;張輝鋒;吳海琴;任靜;張桂蓮;張茹;展淑琴;;CD40在癲癇大鼠大腦皮層及海馬中的表達(dá)變化[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年07期

10 鄭一;高玉紅;吳士文;于生元;;Oligo基因芯片分析黃芪多糖對(duì)腦缺血再灌注大鼠DND的保護(hù)作用[J];山東中醫(yī)雜志;2013年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 樹(shù)海峰;SVZ來(lái)源的神經(jīng)前體細(xì)胞參與皮質(zhì)發(fā)育障礙致癇機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 闞敏宸;右美托咪啶對(duì)電點(diǎn)燃癲癇大鼠的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

3 賀教江;IL-17在大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙癲癇發(fā)生中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 劉志廣;腺苷A_1受體在癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用及其與GABA信號(hào)通路相關(guān)性的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 葉園珍;不同發(fā)育期腦內(nèi)有髓神經(jīng)纖維損傷在癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

6 李真;HMGB1在幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)中的作用研究[D];山東大學(xué);2013年

7 甄軍麗;慢性間歇性低壓低氧對(duì)癲癇大鼠的腦保護(hù)作用和機(jī)制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

8 王偉;Nrf2-ARE信號(hào)通路在癲癇腦損傷中的作用及萊菔硫烷的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

9 馬頌華;IL-6神經(jīng)保護(hù)作用的鈣離子通道機(jī)制及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[D];蘇州大學(xué);2014年

10 李剛;左乙拉西坦對(duì)CD8~+T淋巴細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性功能的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉洋;癲癇患兒紅細(xì)胞免疫功能與紅細(xì)胞補(bǔ)體受體1密度相關(guān)基因多態(tài)性的關(guān)系[D];吉林大學(xué);2011年

2 余年;炎癥反應(yīng)對(duì)海人酸致癇大鼠腦P-糖蛋白表達(dá)的影響：NF-κB的重要作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

3 毛玲艷;原發(fā)性癲癇患者外周血細(xì)胞因子及CD4~+CD25~（high）調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與癲癇嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

4 吳文娟;左乙拉西坦、拉莫三嗪對(duì)癲癇患兒血中IgA、IgG、IgM及CD3、CD4、CD8、ICAM-1水平的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

5 張川;急性腦梗死患者血清S100B蛋白水平的變化及其臨床意義分析[D];鄭州大學(xué);2013年

6 馬彩云;綠茶多酚對(duì)癲癇大鼠海馬XIAP和Caspase-3表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

7 牛鳳鶴;1、第一部分 顳葉癲癇的遺傳易感性研究 2、第二部分 發(fā)作性運(yùn)動(dòng)源性手足舞蹈徐動(dòng)癥致病基因的篩查及突變體的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 王莉;內(nèi)源性大麻素在癲癇發(fā)生中的作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 劉莎莎;癇性放電信號(hào)的傳遞機(jī)制：實(shí)踐與假說(shuō)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 陳蘊(yùn);丙戊酸鈉、丙戊酸鎂在癲癇治療中的療效對(duì)比[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：699290