本文關(guān)鍵詞：載4HPR脂質(zhì)微泡的制備及其聯(lián)合超聲對(duì)瘢痕疙瘩的作用研究

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【摘要】：目的制備載N-(4-羥基苯基)維生素甲酰胺[N-(4-hydroxyphenyl)retinamide,4HPR]脂質(zhì)微泡(4HPR-loaded lipid microbubbles,4HPR-LM),并探討其聯(lián)合超聲(Ultrasound,US)對(duì)瘢痕疙瘩的作用。方法采用薄膜-超聲分散法制備載4HPR脂質(zhì)體(4HPR-loaded liposome,4HPR-L),并采用單因素考察及正交試驗(yàn)對(duì)4HPR-L的制備條件及處方加以優(yōu)化;在4HPR-L的基礎(chǔ)上采用超聲空化法制備4HPR-LM,通過(guò)透射電鏡(transmission electron microscopy,TEM)法、動(dòng)態(tài)光散射法及 HPLC(high-performance liquid chromatograph,HPLC)法,對(duì)其外觀形態(tài)、粒徑分布、Zeta電位、包封率、載藥量、物理穩(wěn)定性、溫度及超聲敏感性等制劑學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了考察。通過(guò)MTT比色實(shí)驗(yàn)對(duì)體外實(shí)驗(yàn)超聲參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,采用激光共聚焦顯微鏡法觀察香豆素-6脂質(zhì)微泡的入胞情況,通過(guò)細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)分別評(píng)價(jià)空白脂質(zhì)微泡(Blank-loaded lipid microbubbles,Blank-LM)的生物相容性及游離 4HPR、單純 4HPR-LM、4HPR-LM聯(lián)合超聲的細(xì)胞增殖抑制作用,采用AnnexinV-FITC/PI雙染法和Hoechst33258熒光染色法觀察游離4HPR及4HPR-LM聯(lián)合超聲誘導(dǎo)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(Human Keloid Fibroblasts,HKFs)的凋亡情況。建立裸鼠瘢痕疙瘩皮下移植瘤模型,觀察游離4HPR及4HPR-LM聯(lián)合超聲的體內(nèi)抑瘤作用,并對(duì)其應(yīng)用安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果優(yōu)化實(shí)驗(yàn)確定制備條件為:三氯甲烷2 ml,旋蒸30 min,水浴溫度50℃,轉(zhuǎn)速120 rpm/min,5%葡萄糖溶液8 ml,旋轉(zhuǎn)水化溶脹時(shí)間20 min,探頭超聲時(shí)間5 min,過(guò)0.22 μm濾膜次數(shù) 7 次;脂質(zhì)體處方為:EPC:Chol(g:g)為 11:1、4HPR 為 3mg、mPEG-DSPE2000為3 mg:制備的4HPR-L透射電鏡下顯示為大小均勻、外觀圓整的球形或類球形結(jié)構(gòu):馬爾文粒徑儀檢測(cè)顯示平均粒徑為(122.87±5.06)nm,Zeta電位為(-43.8±1.0)mV,密封保存(4℃)30天外觀、平均粒徑和Zeta電位均無(wú)明顯變化,7 d、15 d、30 d其滲漏率分別為(1.30±0.89)%、(3.15±0.75)%、(5.88±0.63)%,說(shuō)明制備的 4HPR-L 4℃冰箱內(nèi)密封保存 30d穩(wěn)定性良好;4HPR-LM平均粒徑為(113.80±3.27)nm,Zeta電位為(-35.5±1.10)mV,包封率為(94.48±1.05)%,載藥量為(8.31±0.33)%,具有一定的溫度及超聲敏感性,為其超聲輻照下體內(nèi)釋藥提供了理論支撐。MTT實(shí)驗(yàn)確定體外實(shí)驗(yàn)超聲參數(shù)設(shè)置為3 MHz,0.7 w/cm2,60s;激光共聚焦實(shí)驗(yàn)顯示脂質(zhì)微泡的入胞速度很快,在10 min內(nèi)基本能進(jìn)入細(xì)胞,而超聲輻照能促進(jìn)入胞作用;細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)顯示在本實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),Blank-LM對(duì)HKFs的抑制率均在9.67%以內(nèi),表明載體材料的生物相容性良好;4HPR及4HPR-LM對(duì)HKFs的生長(zhǎng)增殖作用均表現(xiàn)出濃度及時(shí)間依賴性,相比于游離4HPR,4HPR-LM能更有效地抑制HKFs的生長(zhǎng)增殖,組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而4HPR-LM聯(lián)合超聲輻照相比于游離4HPR及單純4HPR-LM則表現(xiàn)出更強(qiáng)地抑制HKFs的生長(zhǎng)增殖作用,各組間比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示,與游離4HPR相比,4HPR-LM聯(lián)合超聲能更有效地誘導(dǎo)HKFs的凋亡(P0.01)。4HPR-LM聯(lián)合超聲亦較游離4HPR表現(xiàn)出更好地抑制人瘢痕疙瘩組織塊生長(zhǎng)的效果(P0.01),所有裸鼠心、肝、脾、腎HE染色均未見(jiàn)明顯器質(zhì)性變化,在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有裸鼠一般狀態(tài)均良好,體重?zé)o明顯差異,未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)發(fā)生。結(jié)論 制備的4HPR-L穩(wěn)定性良好,能對(duì)疏水性極強(qiáng)的4HPR進(jìn)行良好的包封,極大地提高了 4HPR的水溶性,為4HPR的進(jìn)一步研究奠定了良好的基礎(chǔ);最終制備的4HPR-LM聯(lián)合超聲輻照在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中顯示出較好地抑制HKFs生長(zhǎng)增殖、誘導(dǎo)凋亡及抑制瘢痕疙瘩生長(zhǎng)的作用。4HPR-LM聯(lián)合US是一種有效提高藥物療效的方法,有望成為治療瘢痕疙瘩的一種新途徑,值得進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：4HPR 脂質(zhì)體 微泡 超聲 瘢痕疙瘩
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-13
• 中英文對(duì)照表13-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 載4HPR脂質(zhì)體及載4HPR脂質(zhì)微泡的制備與表征16-42
• 第一節(jié) 載4HPR脂質(zhì)體中藥物含量及包封率檢測(cè)方法的建立16-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 2.2.1 HPLC檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇16
• 2.2.2 4HPR含量體外檢測(cè)色譜條件16-17
• 2.2.3 4HPR含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制17
• 2.2.4 專屬性實(shí)驗(yàn)17
• 2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)17
• 2.2.6 4HPR-L包封率檢測(cè)方法的建立17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論18-22
• 2.3.1 4HPR紫外掃描結(jié)果圖18-19
• 2.3.2 4HPR體外含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線19
• 2.3.3 專屬性實(shí)驗(yàn)19-20
• 2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn)20
• 2.3.5 4HPR脂質(zhì)體包封率檢測(cè)方法的建立20-22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 第二節(jié) 載4HPR脂質(zhì)體制備工藝及處方的優(yōu)化23-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 2.2.1 載4HPR脂質(zhì)體的制備23
• 2.2.2 單因素考察優(yōu)化制備工藝23-24
• 2.2.3 處方的單因素考察24-25
• 2.2.4 處方的正交實(shí)驗(yàn)25
• 2.2.5 工藝重現(xiàn)性考察25-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論26-34
• 2.3.1 制備條件的單因素考察26-31
• 2.3.2 處方的單因素考察31-32
• 2.3.3 處方的正交優(yōu)化設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 2.3.4 工藝重現(xiàn)性33-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 第三節(jié) 載4HPR脂質(zhì)體及載4HPR脂質(zhì)微泡的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)35-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 2.2.1 4HPR-L的制備35
• 2.2.2 4HPR-LM的制備35
• 2.2.3 4HPR-L與4HPR-LM包封率的對(duì)比35
• 2.2.4 4HPR-L與4HPR-LM的表征35-36
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論36-40
• 2.3.1 4HPR-L與4HPR-LM包封率的對(duì)比36-37
• 2.3.2 4HPR-L與4HPR-LM的表征37-40
• 2.4 小結(jié)40-42
• 第三章 4HPR-LM聯(lián)合超聲對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的作用研究42-54
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法42-45
• 3.2.1 入瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)42-43
• 3.2.2 細(xì)胞傳代43
• 3.2.3 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線43
• 3.2.4 體外實(shí)驗(yàn)超聲參數(shù)的篩選43-44
• 3.2.5 細(xì)胞攝取試驗(yàn)44
• 3.2.6 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)44
• 3.2.7 細(xì)胞凋亡試驗(yàn)44-45
• 3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法45
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論45-53
• 3.3.1 原代培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)狀況45-46
• 3.3.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線46
• 3.3.3 超聲參數(shù)篩選46-47
• 3.3.4 細(xì)胞攝取試驗(yàn)47-48
• 3.3.5 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)48-51
• 3.3.6 細(xì)胞凋亡試驗(yàn)51-53
• 3.4 小結(jié)53-54
• 第四章 4HPR-LM聯(lián)合超聲對(duì)瘢痕疙瘩裸鼠皮下移植瘤的作用研究54-58
• 4.1 實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)材料54
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法54-55
• 4.2.1 瘢痕疙瘩裸鼠皮下移植瘤模型的建立54
• 4.2.2 4HPR-LM聯(lián)合超聲體內(nèi)抑制瘢痕疙瘩生長(zhǎng)作用及初步安全性評(píng)價(jià)54
• 4.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法54-55
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論55-57
• 4.3.1 瘢痕疙瘩裸鼠皮下移植瘤模型的評(píng)估55
• 4.3.2 瘢痕疙瘩裸鼠皮下移植瘤塊體積變化55-56
• 4.3.3 瘢痕疙瘩裸鼠皮下移植瘤塊組織學(xué)變化56
• 4.3.4 初步安全性評(píng)價(jià)56-57
• 4.4 小結(jié)57-58
• 第五章 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-65
• 綜述65-74
• 參考文獻(xiàn)70-74

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉明義,孫喬莉;雙側(cè)耳垂巨大瘢痕疙瘩12例[J];山東醫(yī)藥;2000年22期

2 劉美蓮,陳煌基,魏明,張克勤;不同放射方法治療155例瘢痕疙瘩術(shù)后療效分析[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年01期

3 王少華,呂世軍,王燕華,吳洪娟,黃文波,呂建萍,郭愛(ài)華;細(xì)胞生長(zhǎng)因子與瘢痕疙瘩形成的關(guān)系[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年03期

4 景紅霞,李秀研,景黎明,葉寧;康尼克通治療瘢痕疙瘩效果觀察[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

5 劉文閣,李素娟,蔡玉琴;綜合療法治療瘢痕疙瘩的療效觀察[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2000年01期

6 鄭學(xué)毅,涂平,張建中,馬圣清;血小板衍生生長(zhǎng)因子在瘢痕疙瘩的表達(dá)[J];中華醫(yī)學(xué)美容雜志;2000年02期

7 許鳳芝,馬奇,林艷芳,魏?jiǎn)⒋?117例胸前瘢痕疙瘩的治療[J];臨床皮膚科雜志;2001年05期

8 林尚澤,張楠,梁亞;耳垂瘢痕疙瘩的綜合治療[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2001年02期

9 賀翠云,陳冬軍,趙巧云;冷凍治療耳垂瘢痕疙瘩86例療效觀察[J];包頭醫(yī)學(xué);2001年03期

10 廖農(nóng);注射改良法治療瘢痕疙瘩的臨床觀察[J];廣東醫(yī)學(xué);2001年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡傳揆;方大定;趙炳南;葉干連;馬海德;;用中藥治療瘢痕疙瘩的初步結(jié)果[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)皮膚科分會(huì)第六次學(xué)術(shù)年會(huì)、趙炳南學(xué)術(shù)思想研討會(huì)、全國(guó)皮膚科中醫(yī)外治高級(jí)研修班論文集[C];2009年

2 張國(guó)軍;金小峰;劉軍;;瘢痕疙瘩手術(shù)聯(lián)合放射治療的觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

3 李惠斌;陳芳;;手術(shù)配合術(shù)后早期放療治療瘢痕疙瘩的療效分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 蔡景龍;;瘢痕疙瘩的臨床特點(diǎn)及分類探討[A];第七屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)美容與整形醫(yī)師大會(huì)論文集[C];2010年

5 李楊;郭樹(shù)忠;張曦;盧丙侖;舒茂國(guó);;難治性瘢痕疙瘩聯(lián)合治療一例報(bào)道[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

6 王友彬;梁偉中;孫顯松;王曉軍;;“X”切口瘢痕瓣形成在瘢痕疙瘩切除后耳廓形態(tài)修復(fù)中的應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

7 李楊;郭樹(shù)忠;張曦;盧丙侖;舒茂國(guó);;難治性瘢痕疙瘩聯(lián)合治療一例報(bào)道[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

8 陳曉棟;張國(guó)成;葉順章;;血小板衍化生長(zhǎng)因子受體蛋白在瘢痕疙瘩中的表達(dá)[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

9 楊崇格;馮麗娟;;30例瘢痕疙瘩綜合治療分析[A];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)修復(fù)重建外科專業(yè)委員會(huì)第十四次全國(guó)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

10 姜春秋;;耳廓瘢痕疙瘩的相關(guān)因素及診療探討(附非洲萊索托88例分析)[A];第十一次湖北省整形外科學(xué)術(shù)會(huì)議第四次湖北省醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 文伍;瘢痕疙瘩該如何治療[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

2 衣曉峰;治療瘢痕疙瘩 避免步入誤區(qū)[N];健康報(bào);2004年

3 皮膚科 黎勝?gòu)?qiáng);瘢痕疙瘩的防治[N];家庭醫(yī)生報(bào);2003年

4 特約記者 衣曉峰;治療瘢痕疙瘩 避免步入誤區(qū)[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

5 水天;同息通治療瘢痕疙瘩的療效觀察[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

6 中國(guó)醫(yī)科院整形外科醫(yī)院 王連召;瘢痕疙瘩不能一切了之[N];健康報(bào);2008年

7 武警總醫(yī)院 白曉東 陶海;瘢痕疙瘩綜合治療不復(fù)發(fā)[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

8 胡獻(xiàn)國(guó)（副主任醫(yī)師）;巧除瘢痕疙瘩[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2003年

9 趙晴晴;瘢痕疙瘩咋治療？[N];健康時(shí)報(bào);2004年

10 河北 主治醫(yī)師 胡松;祛除瘢痕疙瘩外治方[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 滕國(guó)棟;全基因組重測(cè)序技術(shù)分析漢族瘢痕疙瘩家系基因多態(tài)性及初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

2 劉清亮;瘢痕疙瘩及其周圍皮膚血流灌注的差異及其相關(guān)因素的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 毛運(yùn)春;前胸部瘢痕疙瘩微循環(huán)與膠原表達(dá)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

4 羅勇;瘢痕疙瘩差異表達(dá)基因的篩選及標(biāo)志蛋白的分析[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 陳曉棟;纖維化相關(guān)細(xì)胞因子受體在瘢痕疙瘩中表達(dá)的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

6 朱飛;中國(guó)漢族人瘢痕疙瘩易感基因相關(guān)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

7 夏煒;瘢痕疙瘩與正常皮膚成纖維細(xì)胞中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子差異表達(dá)及調(diào)控機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 焦虎;瘢痕疙瘩自身免疫疾病特征和多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白為治療靶點(diǎn)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

9 王強(qiáng);手術(shù)結(jié)合術(shù)后5%咪喹莫特乳膏外用治療瘢痕疙瘩的臨床療效及機(jī)理研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 楊志勇;胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3在瘢痕疙瘩中的表達(dá)及作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡幸蕙;應(yīng)用電子線對(duì)瘢痕疙瘩術(shù)后治療效果的臨床研究—去除剖腹產(chǎn)及隆乳手術(shù)造成之瘢痕疙瘩[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

2 丁麗;手術(shù)聯(lián)合電子線治療瘢痕疙瘩臨床療效觀察[D];吉林大學(xué);2009年

3 李輝正;瘢痕疙瘩術(shù)后電子線治療70例回顧性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 孟洪君;瘢痕疙瘩術(shù)后電子線治療57例分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

5 郭雷洋;瘢痕疙瘩微淋巴管密度與侵襲性生長(zhǎng)的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

6 丁云鵬;兩種瘢痕疙瘩綜合治療方案對(duì)比研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

7 道日娜;V形離斷式術(shù)式治療耳廓瘢痕疙瘩[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

8 唐潔;TSG-6與MMP-9在瘢痕疙瘩邊緣部的表達(dá)及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

9 杜光遠(yuǎn);耳瘢痕疙瘩及其臨床研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

10 唐小清;CYLD在瘢痕疙瘩中的表達(dá)及曲古抑菌素A和三羥基異黃酮對(duì)CYLD的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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