本文關(guān)鍵詞：PTC124治療彈性纖維假黃瘤的初步研究

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【摘要】：研究背景與目的 彈性纖維假黃瘤(Pseudoxanthoma elasticum, PXE)，是一種少見的常染色體遺傳性疾病，由16號染色體上的ABCC6基因突變引起的，主要累及彈性纖維和結(jié)締組織，造成彈力纖維降解及組織鈣化變硬,可侵犯人體多個器官和系統(tǒng),主要表現(xiàn)為皮膚、眼、心血管系統(tǒng)損害，發(fā)病率約為1:50000。迄今為止，共發(fā)現(xiàn)ABCC6基因突變近600個。無義突變（nonsense mutation）是指由于某個堿基的改變，使代某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子，從而使肽鏈合成提前終止，肽鏈合成中斷。PXE患者中無義突變的比例近40%,其中R1141X占30%，是主要的致病原因之一，目前缺乏有效的治療手段。 PTC124（Ataluren），是PTC Therapeutics公司生產(chǎn)的小分子藥劑，主要通過降低核糖體對早熟終止密碼子（Premature Termination codon， PTC）的敏感性，或忽略早熟終止密碼子，從而實(shí)現(xiàn)對早熟終止密碼子的通讀（Read-through）。目前PTC124已經(jīng)應(yīng)用在治療遺傳性疾病的臨床試驗(yàn)中，其中囊性纖維化（CysticFibrosis）已經(jīng)進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)。 本實(shí)驗(yàn)通過體外研究，觀察PTC124對PXE患者早熟終止密碼子的通讀作用，為臨床治療提供新的思路和辦法。 研究方法 1．體外實(shí)驗(yàn)以人HEK293細(xì)胞為研究模型 在PCMV6-hABCC6-DDK質(zhì)粒中建立已知的7種不同的早熟終止密碼子突變模型，轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞， PTC124處理72小時，免異熒光染色法和細(xì)胞內(nèi)ELISA法檢測早熟終止密碼子的通讀效率。 2．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以斑馬魚為研究模型 R1141X是最常見的無義突變，占35%，根據(jù)R1141X早熟終止密碼子通讀后變化的氨基酸序列，在BS/SK-hABCC6質(zhì)粒中，構(gòu)建3種可能的錯義突變模型，生成相應(yīng)的mRNA，顯微注射入斑馬魚胚胎進(jìn)行拯救分析實(shí)驗(yàn)，觀察斑馬魚胚胎的存活率而分析各種錯義突變的作用。 結(jié)果 1．體外實(shí)驗(yàn)以人HEK293細(xì)胞為研究模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ①PTC124濃度在0-40umol/L時無細(xì)胞毒性。②對7種無義突變，PTC124可以提高早熟終止密碼子的通讀效率，濃度在5umol/L時通讀效率最高。③PTC124濃度在5umol/L時，R1164X and R1275X的通讀效率最高，8%。④早熟終止密碼子的通讀效率不僅受藥物濃度影響，還受早熟終止密碼子后一位氨基酸序列影響，且當(dāng)+1位置的序列為“C”時最高。 2．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以斑馬魚為研究模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ①早熟終止密碼子通讀后3種可能的錯義突變模型，生成相應(yīng)的mRNA，，可以使斑馬魚胚胎正常發(fā)育，存活率分別為WT90.6%,TGG73.4%，TGC92.5%，GGA84%,陽性對照組（注射morpholino、R1141X）存活率29%，陰性對照組（注射standard control morpholino）存活率88%，治療組與mopholino對照組之間有顯著性差異（p0.05）。②3種錯義突變模型之間和突變模型與陰性對照組，斑馬魚胚胎存活率無顯著性差異（p0.05）。 結(jié)論 1． PTC124可以提高早熟終止密碼子的通讀效率，濃度在5ug/mL時通讀效率最高； 2．早熟終止密碼子的通讀效率不僅受藥物濃度影響，還受早熟終止密碼子后一位氨基酸序列影響，且當(dāng)+1位置的序列為“C”時最高； 3．早熟終止密碼子通讀后3種可能的錯義突變，生成相應(yīng)的mRNA，可以使斑馬魚胚胎正常發(fā)育，存活率與對morpholino照組組之間有顯著性差異（p0.05）。 4．PTC124對彈性纖維假黃瘤患者有潛在的治療作用，需要進(jìn)一步研究
【關(guān)鍵詞】：彈性纖維假黃瘤 無義突變 早熟終止密碼子通讀作用 PTC124斑馬魚補(bǔ)救分析
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 參考文獻(xiàn)10-12
• 第一部分 PTC124 對彈性纖維假黃瘤(PXE)無義突變的通讀作用12-53
• 前言12
• 材料與方法12-35
• 結(jié)果35-46
• 討論46-50
• 結(jié)論50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 第二部分 斑馬魚胚胎發(fā)育系統(tǒng)檢測ABCC6多肽鏈功能的研究53-64
• 前言53
• 材料與方法53-57
• 結(jié)果57-59
• 討論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 全文總論64-66
• 文獻(xiàn)綜述66-77
• 參考文獻(xiàn)71-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況77-78
• 致謝78-79

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 于海云;浦介麟;;抗生素治療無義突變所致的遺傳性疾病[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2013年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳劍芳;四種新的基因突變導(dǎo)致血友病B分子發(fā)病機(jī)制研究及通讀療法對無義突變所致血友病治療的初步研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：948592