本文關鍵詞：Notch信號分子在血熱型銀屑病患者單個核細胞中的表達

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【摘要】：銀屑病俗稱“牛皮癬”,中醫(yī)稱之為“白疙”,目前被認為是一種以紅斑鱗屑為主要臨床表現(xiàn)的慢性、炎癥性皮膚病,通常侵犯皮膚和關節(jié),且易復發(fā)。近年來發(fā)病率有逐漸增高的趨勢,銀屑病的確切病因仍有待研究,多數(shù)專家認為銀屑病是由遺傳因素和環(huán)境因素等多種因素相互交織作用所導致。其整個發(fā)病過程受到細胞因子網(wǎng)絡與多種信號通路的調(diào)控。 Notch信號通路由Notch受體、Notch配體和CSL DNA結合蛋白三部分組成。廣泛分布于造血干細胞,胚胎干細胞,淋巴細胞,血管內(nèi)皮細胞等多種細胞表面。研究結果表明,Notch信號在銀屑病的真皮處于活化狀態(tài),可通過影響T細胞的發(fā)育、活化及調(diào)節(jié)細胞因子的分泌參與銀屑病的發(fā)生。有研究顯示在包括角質(zhì)形成細胞等多種表皮細胞的表面,Notch及其配體均有大量表達,且特異性的Notch信號活化在維持皮膚細胞自身更新及分化過程中起重要作用。異常的Notch信號可能有助于揭示銀屑病等皮膚疾病的發(fā)病機制。 目前國內(nèi)外藥物干預Notch信號通路治療銀屑病的研究仍處于空白階段,作用機理研究更為匱乏。因此,從免疫調(diào)節(jié)角度進行調(diào)控Notch信號通路治療銀屑病的藥物研究十分必要,且具備廣泛的探索空間。血熱型銀屑病相當于銀屑病的初期(急性期)是臨床表現(xiàn)最典型且多見的類型,祛銀顆粒是導師白彥萍教授的自擬方藥,以清熱涼血解毒中藥為主要成分,其良好的臨床療效已通過前期的臨床及動物模型研究得到證實。但其具體作用機制和作用靶點尚不清楚。本研究旨在從分子生物學角度探討Notch信號傳導分子是否在血熱型銀屑病患者中發(fā)揮一定的作用。了解各傳導分子的活躍情況將有助于支持后續(xù)清熱涼血方藥對Notch信號通路調(diào)控的相關研究。 目的：揭示血熱型銀屑病患者單個核細胞中Notch信號分子(Notch1-4、Delta1、 Delta3-4、Jaggedl-2)的表達情況,并對銀屑病患者的病情嚴重程度與Notch信號分子的表達關系做出客觀評價。 方法：收集納入血熱型銀屑病患者,進行PAS I評分并采集患者外周血,提取出單個核細胞。以健康人為參照,分別采用實時熒光定量PCR法檢測27例血熱型患者和27例健康人的Notch信號分子mRNA表達水平；運用流式細胞術對6例血熱型銀屑病患者和5例健康人的Notch信號分子平均熒光強度的表達進行檢測；采用蛋白免疫印記法(Western Blot)檢測血熱型銀屑病30例和健康人30例的Notch信號通路的相關蛋白表達。 結果：(1)血熱型銀屑病患者單個核細胞中Notch2的mRNA水平較健康人顯著升高,兩者間差異有統(tǒng)計學意義,P=0.036(P0.05),其表達與PASI評分呈正相關趨勢。 (2)血熱型銀屑病患者單個核細胞中Notch3的mRNA水平較健康人顯著降低,兩者間有顯著性差異,P=0.008(P0.01),未發(fā)現(xiàn)其表達與PASI評分呈正相關趨勢。 (3) Notch1、Notch4、Jagged1-2、Delta1、Delta3-4,在血熱型銀屑病患者單個核細胞中的mRNA水平較健康人無明顯差異,兩者間無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (4)血熱型銀屑病患者組的Notch2平均熒光強度(MFI)低于健康人對照組的Notch2MFI表達水平,兩者比較有顯著差異(P0.01),其與PASI評分無明顯相關性。 (5)血熱型銀屑病患者組的Notch1、Noth3平均熒光強度(MFI)與健康人對照組的Notch1、Noth3MFI兩者比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (6) Western Blot顯示健康人組與血熱型患者組比較,血熱型患者組Delta4蛋白表達明顯上調(diào),有顯著統(tǒng)計學差異(P0.01)。其與PASI評分無明顯相關性。 (7) Western Blot顯示健康人組與血熱型患者組比較,Notch1、Deltal蛋白表達無明顯差異,兩者間無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論：Notch2在mRNA和蛋白表達方面較健康人均有所升高,Delta4的蛋白表達較健康人升高。其中Notch2mRNA與表達與銀屑病的嚴重程度呈正相關；Notch3mRNA表達較健康人有所下降,但其與銀屑病的嚴重程度無明顯相關性。Notch信號通路參與了血熱型銀屑病的發(fā)生、發(fā)展等調(diào)節(jié)過程。
【關鍵詞】：Notch 信號通路 血熱型 銀屑病 單個核細胞
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略語9-10
• 第一部分 文獻綜述10-35
• 綜述一：中醫(yī)“血分論治”銀屑病內(nèi)服用藥規(guī)律探討及研究進展10-22
• 參考文獻19-22
• 綜述二：Notch信號通路與銀屑病的相關性研究概況22-35
• 參考文獻31-35
• 第二部分 實驗研究35-125
• 前言35-37
• 實驗一：實時熒光定量PCR檢測血熱型銀屑病人單個核細胞中Notch信號分子microRNA的表達研究37-96
• 材料和方法37-44
• 結果44-93
• 討論93-96
• 實驗二：流式細胞術檢測血熱型銀屑病人單個核細胞中Notch受體的表達96-107
• 材料和方法96-99
• 結果99-106
• 討論106-107
• 實驗三：蛋白質(zhì)印跡法檢測血熱型銀屑病人單個核細胞中Notch信號分子的表達107-122
• 材料和方法107-112
• 結果112-120
• 討論120-122
• 參考文獻122-125
• 全文小結125-126
• 不足與展望126-127
• 致謝127-128
• 個人簡歷128

【參考文獻】

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本文編號：939260