本文關(guān)鍵詞：免疫熒光技術(shù)在自身免疫性水皰病及先天性大皰性表皮松解癥診斷中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 免疫熒光 自身免疫性水皰病 先天性大皰性表皮松解癥 診斷

【摘要】：免疫熒光是一種重要的熒光標(biāo)記診斷技術(shù),利用熒光素標(biāo)記相應(yīng)抗體,通過(guò)抗原抗體相互作用檢測(cè)組織或血液中是否存在相應(yīng)抗原或抗體,從而對(duì)其進(jìn)行定位診斷。該方法在自身免疫性水皰病的診斷中占據(jù)著尤為重要的地位,近年來(lái)此方法也逐漸擴(kuò)展至先天性大皰性表皮松解癥的定位診斷中。本研究主要探討免疫熒光技術(shù)在自身免疫性水皰病及先天性大皰性表皮松解癥診斷中的應(yīng)用。第1部分間接免疫熒光在自身免疫性表皮內(nèi)水皰病診斷中的應(yīng)用目的應(yīng)用間接免疫熒光的方法,比較正常人皮膚、猴食管及鹽裂正常人皮膚三種不同底物檢測(cè)自身免疫性表皮內(nèi)水皰病循環(huán)抗體的沉積情況及其敏感性和特異性差異。方法選取診斷明確天皰瘡71例為病例組,對(duì)照組包括自身免疫性表皮下水皰病26例、慢性濕疹15例和正常對(duì)照15例,分別進(jìn)行正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物的間接免疫熒光,觀察熒光抗體的沉積情況,比較不同種類自身免疫性表皮內(nèi)水皰病行不同底物間接免疫熒光的敏感性和特異性及其差異。結(jié)果天皰瘡患者在以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚三種底物行間接免疫熒光中呈陽(yáng)性者均可見(jiàn)到表皮棘細(xì)胞間熒光物質(zhì)網(wǎng)狀沉積。以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物行間接免疫熒光對(duì)天皰瘡診斷的敏感性分別為31.0%、83.1%、70.4%,特異性分別為96.4%、96.4%、94.6%。三種不同底物對(duì)天皰瘡診斷敏感性進(jìn)行比較,正常人皮膚間接免疫熒光與猴食管及鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)；在Dsg1、Dsg3均陽(yáng)性和僅Dsgl陽(yáng)性天皰瘡患者中,正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；三種不同底物行間接免疫熒光對(duì)天皰瘡診斷的特異性間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；僅Dsg3陽(yáng)性天皰瘡患者在以猴食管為底物時(shí)診斷敏感性明顯高于僅Dsgl陽(yáng)性天皰瘡患者,且兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在僅Dsgl陽(yáng)性天皰瘡患者中對(duì)猴食管間接免疫熒光陰性與陽(yáng)性患者抗Dsg1 ELISA指數(shù)水平進(jìn)行比較,兩者抗體水平無(wú)顯著性差異(P0.05),對(duì)鹽裂間接免疫熒光陰性與陽(yáng)性兩組患者其抗Dsg1 ELISA指數(shù)水平進(jìn)行比較兩者同樣無(wú)顯著性差異(P0.05)。結(jié)論對(duì)于天皰瘡,猴食管和鹽裂正常人皮膚為底物間接免疫熒光敏感性均高于以正常人皮膚為底物間接免疫熒光,而猴食管與鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光間敏感性無(wú)顯著性差異,因此,在猴食管不易取得時(shí),可使用鹽裂間接免疫熒光替代正常人皮膚間接免疫熒光。且猴食管為底物間接免疫熒光對(duì)于存在Dsg3抗體的患者敏感性高于僅有Dsgl抗體的患者。猴食管、鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光的結(jié)果與Dsgl ELISA指數(shù)水平無(wú)關(guān)。第2部分 間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用目的 應(yīng)用間接免疫熒光的方法,比較正常人皮膚、猴食管及鹽裂正常人皮膚三種不同底物檢測(cè)自身免疫性表皮下水皰病循環(huán)抗體的沉積情況及其敏感性和特異性差異。方法選取自身免疫性表皮下水皰病26例為病例組,對(duì)照組包括天皰瘡71例,慢性濕疹15例及正常對(duì)照15例,分別進(jìn)行正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物的間接免疫熒光,觀察熒光抗體的沉積情況,比較不同種類自身免疫性表皮下水皰病行不同底物間接免疫熒光的敏感性和特異性及其差異。結(jié)果大皰性類天皰瘡患者在以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚三種底物行間接免疫熒光中呈陽(yáng)性者均可見(jiàn)到熒光物質(zhì)沿基底膜帶呈線性沉積,鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光可見(jiàn)大皰性類天皰瘡患者熒光物質(zhì)線性沉積于表皮側(cè),而獲得性大皰性表皮松解癥和P200類天皰瘡患者線性沉積于真皮側(cè)。三種底物(正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚)在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的敏感性分別為42.3%、69.2%、96.1%,特異性分別為98%、100%、97%,其中在大皰性類天皰瘡患者中診斷的敏感性分別為40.0%、75.0%、90.0%；三種不同底物對(duì)于表皮下水皰病診斷的敏感性比較,正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),猴食管間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；三者特異性間均無(wú)顯著性差異(P0.05)。在大皰性類天皰瘡中三種不同底物診斷的敏感性比較,正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。猴食管間接免疫熒光陰性與陽(yáng)性兩組大皰性類天皰瘡患者抗BP180 ELISA指數(shù)相比兩者抗體水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。結(jié)論鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光對(duì)于自身免疫性表皮下水皰病的診斷優(yōu)于以猴食管和正常人皮膚為底物的間接免疫熒光。猴食管間接免疫熒光的結(jié)果與BP180 ELISA指數(shù)水平無(wú)關(guān)。第3部分鹽裂間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用目的使用鹽裂間接免疫熒光的方法協(xié)助診斷3例特殊自身免疫性表皮下水皰病。方法運(yùn)用鹽裂間接免疫熒光的方法篩出特殊自身免疫性表皮下水皰病,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及免疫印跡的方法輔助明確診斷。結(jié)果明確診斷1例大皰性類天皰瘡,1例獲得性大皰性表皮松解癥及1例P200類天皰瘡。結(jié)論鹽裂間接免疫熒光表皮側(cè)線狀沉積提示為大皰性類天皰瘡；鹽裂間接免疫熒光真皮側(cè)線狀沉積需進(jìn)一步完善ELISA及免疫印跡明確循環(huán)中相關(guān)抗體從而確定診斷。第4部分免疫熒光在先天性大皰性表皮松解癥分型診斷中的應(yīng)用目的通過(guò)對(duì)先天性大皰性表皮松解癥患者皮損進(jìn)行不同抗體的熒光及免疫組化標(biāo)記,對(duì)其進(jìn)行分型診斷。方法收集2015年1月-6月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院門診先天性大皰性表皮松解癥患者5例,取其新發(fā)水皰處皮損分別制成冰凍切片及石蠟切片,分別使用免疫熒光和免疫組化的方法對(duì)其進(jìn)行角蛋白K14、Ⅳ型膠原、Ⅶ型膠原標(biāo)記,同時(shí)使用正常人皮膚及鹽裂正常人皮膚作對(duì)比,使用顯微鏡觀察患者皮損處相應(yīng)抗體標(biāo)記部位,根據(jù)標(biāo)記部位不同進(jìn)行結(jié)果的判斷。結(jié)果單純型大皰性表皮松解癥患者角蛋白K14標(biāo)記于水皰中或頂部,Ⅳ型膠原標(biāo)記水皰底部；鹽裂正常人皮膚角蛋白K14標(biāo)記于裂隙頂部,Ⅳ型膠原與Ⅶ型膠原標(biāo)記裂隙底部；營(yíng)養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥患者角蛋白K14及Ⅳ型膠原標(biāo)記水皰頂部,Ⅶ型膠原較對(duì)照明顯減弱或消失。結(jié)論免疫熒光是先天性大皰性表皮松解癥患者分型診斷的重要方法,且免疫熒光分型診斷優(yōu)于免疫組化。
【關(guān)鍵詞】：免疫熒光 自身免疫性水皰病 先天性大皰性表皮松解癥 診斷
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.59;R446.6
【目錄】：

• 縮略詞6-7
• 全文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 研究背景及研究目的14
• 本課題擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題14-15
• 第1部分 間接免疫熒光在自身免疫性表皮內(nèi)水皰病診斷中的應(yīng)用15-27
• 1.1 引言15
• 1.2 材料和方法15-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-24
• 1.4 討論24-25
• 1.5 參考文獻(xiàn)25-27
• 第2部分 間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用27-36
• 2.1 引言27
• 2.2 材料和方法27-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-34
• 2.4 討論34
• 2.5 參考文獻(xiàn)34-36
• 第3部分 鹽裂間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用36-46
• 3.1 引言36
• 3.2 臨床病例資料36-37
• 3.3 材料和方法37-41
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-44
• 3.5 討論44-45
• 3.6 參考文獻(xiàn)45-46
• 第4部分 免疫熒光在先天性大皰性表皮松解癥分型診斷中的應(yīng)用46-55
• 4.1 引言46
• 4.2 材料和方法46-48
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-52
• 4.4 討論52-53
• 4.5 參考文獻(xiàn)53-55
• 全文小結(jié)55-56
• 附56-77
• 附1 論文相關(guān)綜述56-64
• 附2 在讀期間發(fā)表文章64-74
• 附3 在讀期間參加學(xué)術(shù)會(huì)議及學(xué)習(xí)班74-75
• 附4 在讀期間獲獎(jiǎng)情況75-76
• 附5 在讀期間參加學(xué)生工作及志愿活動(dòng)76-77
• 致謝77-79

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