本文關(guān)鍵詞：熱處理在UVB誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞損傷中的作用及其分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 熱處理 UVB 黑素細(xì)胞 氧化應(yīng)激 Hsp70

【摘要】：白癜風(fēng)是一種獲得性、多因性、脫色性疾病,主要特征為表皮功能性黑素細(xì)胞(MC)進(jìn)行性消失導(dǎo)致的白色皮損。應(yīng)用波長在290-320 nm的紫外線(UVB)進(jìn)行光療,是目前白癜風(fēng)最為廣泛和有效的治療手段。表皮的角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)和MC可吸收UVB,并誘發(fā)多種生物效應(yīng),最終促使皮損復(fù)色。除了治療作用,UVB的副作用也不容忽視,高劑量的UVB輻射可以誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、DNA變異等損傷作用,最終導(dǎo)致皮膚老化和皮膚腫瘤。在白癜風(fēng)患者中,廣泛存在抗氧化系統(tǒng)缺陷,高劑量的UVB可以加速M(fèi)C的氧化應(yīng)激反應(yīng),降低治療效果。研究發(fā)現(xiàn),熱處理(42℃,1h)可刺激MC增殖,增強(qiáng)黑色素合成,對白癜風(fēng)具有治療作用。熱處理還可以通過上調(diào)熱休克蛋白(HSP),增加細(xì)胞對多種刺激的耐受力,進(jìn)而提示,熱處理可能在促進(jìn)色素恢復(fù)的同時,降低UVB誘導(dǎo)的各種細(xì)胞損傷。目的:觀察熱處理在UVB誘導(dǎo)的MC損傷中的作用,研究熱處理對誘導(dǎo)型Hsp70分布和表達(dá)的影響,初步探索Hsp70保護(hù)MC對抗UVB損傷的分子機(jī)制。方法:從人包皮獲得原代MC,在3-4次傳代后MC純化。將細(xì)胞分為四組:對照組(37℃正常培養(yǎng))、熱處理組(42℃,1h)、UVB組(100mJ/cm2 UVB輻射)、聯(lián)合組(熱處理后照射100mJ/cm2 UVB),所有組連續(xù)干預(yù)3d。應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞活率,應(yīng)用流式細(xì)胞儀(fcm)檢測細(xì)胞凋亡率,應(yīng)用生物化學(xué)方法檢測總超氧化物歧化酶(sod)活力和丙二醛(mda)水平,應(yīng)用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧(ros)水平,并通過fcm測量細(xì)胞內(nèi)ros,應(yīng)用real-timepcr檢測mnsodmrna表達(dá)水平。為了進(jìn)一步探索熱處理后hsp70水平與uvb損傷之間的關(guān)系,分別在熱處理后0h,2h,4h,6h,8h,10,12h給予500mj/cm2uvb輻射,應(yīng)用westernblot檢測不同時間點(diǎn)hsp70表達(dá)水平,同時應(yīng)用彗星實(shí)驗(yàn)檢測該時間dna的損傷情況。應(yīng)用hsp70特異性的sirna轉(zhuǎn)染mc,沉默hsp70的表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證hsp70對抗uvb損傷的作用。應(yīng)用免疫熒光染色,觀察hsp70在熱處理或uvb輻射后的分布情況,探索hsp分布與dna損傷間的關(guān)系。結(jié)果:1、mc暴露于高劑量uvb輻射(100mj/cm2)后,可顯著增加細(xì)胞dna的損傷(p0.001),降低mnsodmrna水平(p0.01)和總sod活力(p0.01);細(xì)胞內(nèi)ros(p0.001)和mda(p0.001)水平增加;最終增加細(xì)胞凋亡(p0.001),降低mc活率(p0.001)。2、熱處理后再照射uvb,可以顯著降低uvb誘導(dǎo)的dna損傷(p0.05)和凋亡率(p0.001);與uvb組相比,聯(lián)合處理可增加mnsodmrna的表達(dá)(p0.05),提高總sod活力(p0.01),降低mda(p0.001)和ros(p0.001)水平,最終增加mc的活率(p0.001)。3、hsp70的表達(dá)水平和dna的損傷程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.971,p0.001),而且hsp70特異性sirna可以沉默hsp70的表達(dá),并且消除hsp70對uvb損傷的保護(hù)作用(p0.1)。4、即使在hsp70表達(dá)水平不增高的情況下,熱處理刺激hsp70向細(xì)胞核和核仁轉(zhuǎn)位,也可以減少dna損傷(p0.05);高劑量的atp(400μm)可以抑制hsp70向細(xì)胞核轉(zhuǎn)位,進(jìn)而消除熱處理對細(xì)胞dna的保護(hù)作用(p0.1)結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)顯示,預(yù)先熱處理的mc可以通過刺激hsp70的分布和表達(dá),減輕uvb對dna的損傷作用,維持mnsod等抗氧化酶的表達(dá),對抗氧化應(yīng)激損傷,減少細(xì)胞凋亡,提高mc對uvb的耐受。研究證實(shí),熱處理聯(lián)合uvb局部照射治療白癜風(fēng),可以減少uvb誘導(dǎo)的多種損傷,具有良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：熱處理 UVB 黑素細(xì)胞 氧化應(yīng)激 Hsp70
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R758.41
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-22
• 1. 白癜風(fēng)和氧化應(yīng)激13-18
• 2. 熱休克蛋白 70（Hsp70）在應(yīng)激性損傷中的作用18-22
• 實(shí)驗(yàn)一 熱處理在UVB誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞損傷中的作用22-35
• 1 材料22-23
• 2 方法23-29
• 3 結(jié)果29-32
• 4 討論32-35
• 實(shí)驗(yàn)二 熱處理對UVB誘導(dǎo)黑素細(xì)胞損傷保護(hù)機(jī)制的研究35-52
• 1 材料35-39
• 2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-50
• 4 討論50-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-64
• 個人簡歷和研究成果64-65
• 致謝65

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1 王大光,朱文元;干細(xì)胞因子對黑素細(xì)胞調(diào)控的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊);2003年05期

2 勞力民,陳積愫,朱可建,孫國均,熊切正信;色素性基底細(xì)胞上皮瘤中共生的黑素細(xì)胞超微形態(tài)計(jì)量分析[J];中華皮膚科雜志;2003年11期

3 張憲旗,牟寬厚,馬慧群,趙靜,閆小寧,馮捷;α-黑素細(xì)胞刺激素對體外培養(yǎng)黑素細(xì)胞遷移和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2005年05期

4 張憲旗;馮捷;牟寬厚;馬慧群;牛新武;劉超;;堿性成纖維細(xì)胞生長因子和α-黑素細(xì)胞刺激素對體外培養(yǎng)黑素細(xì)胞黏附和遷移的影響[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

5 魯嚴(yán);周梅華;李雪;吳迪;王大光;朱文元;;新型黑素細(xì)胞涂布法移植卡波姆膠載體制備研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志;2012年04期

6 潘興華,陳志龍,黃麗娜;黑素細(xì)胞及黑素的生成與調(diào)節(jié)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年02期

7 項(xiàng)蕾紅,鄭志忠,祝綠川,廖康煌,傅雯雯;同種異體淋巴細(xì)胞與黑素細(xì)胞混合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華皮膚科雜志;2001年01期

8 賈虹;黑素細(xì)胞的生物學(xué)和黑素生成的新進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2002年02期

9 曹文新,吳士明,唐建民;超快脈沖激光對黑素細(xì)胞作用及機(jī)制[J];激光雜志;2002年02期

10 張汝芝,朱文元,夏明玉,馮巖;人表皮黑素細(xì)胞、毛囊無色素黑素細(xì)胞和鼠黑素瘤細(xì)胞的原子力顯微鏡觀察[J];臨床皮膚科雜志;2003年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林新瑜;林鴻剛;何飛;段西凌;;白介素—6對體外培養(yǎng)的黑素細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 洪為松;傅麗芳;尉曉冬;許愛娥;;建立黑素細(xì)胞個體化培養(yǎng)體系的實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 林新瑜;段西凌;林鴻剛;何飛;;白介素-6對體外培養(yǎng)的黑素細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 許愛娥;尉曉冬;;傳代培養(yǎng)的黑素細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的研究[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

5 宋智琦;高麗麗;王楠;;谷氨酸信號通路對表皮黑素細(xì)胞黑素轉(zhuǎn)運(yùn)的作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

6 雷鐵池;;表皮黑素細(xì)胞黑素生成、黑素小體轉(zhuǎn)移及其對氧化應(yīng)激抵抗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

7 堅(jiān)哲;李凱;張瑩;王玲;王志勇;劉玲;李春英;高天文;;過氧化氫誘導(dǎo)人黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的建立[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

8 王玲;李承新;朱東寧;堅(jiān)哲;;Q開關(guān)ND:YAG 1064nm激光照射對體外培養(yǎng)的人表皮黑素細(xì)胞黑素合成的影響[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

9 盧濤;高天文;劉玉峰;李春英;李強(qiáng);高鴿;曹云新;;一種安全簡便的黑素細(xì)胞體外培養(yǎng)法[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

10 訾紹霞;連石;朱威;;天然植物成份對黑素生成的影響及作用機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

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1 張中橋;兩段法培養(yǎng)的黑素細(xì)胞應(yīng)用安全[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

2 張中橋;含黑素細(xì)胞的表皮替代物構(gòu)建成功[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 吳一福;移植同種異體黑素細(xì)胞治療白癜風(fēng)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

4 楊麗佳邋通訊員 吳倪娜;激活前黑素細(xì)胞可治白癜風(fēng)[N];健康報(bào);2008年

5 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院 李映琳;“黑白同治”雙向調(diào)節(jié)[N];健康報(bào);2009年

6 吳一福;浮萍和紫丹參治療白癜風(fēng)有據(jù)可依[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

7 小瓊;手掌為什么曬不黑[N];山西科技報(bào);2000年

8 張學(xué)全;黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

9 本報(bào)記者 馬曉林 通訊員 廖艷苗;病因眾說紛紜 治療方案不一[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

10 ;少年白頭為哪般？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳淑君;毛發(fā)移植對頭皮白癜風(fēng)復(fù)色的臨床療效評估及作用機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 劉麗紅;AngⅡ?qū)谒睾铣傻淖饔眉捌錂C(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 黃也;PDGFRα在人黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用和機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 譚城;中藥單體對黑素合成的影響及黑素細(xì)胞分化標(biāo)記分子在毛囊及白癜風(fēng)皮損處的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2002年

5 馬慧軍;中藥單體促黑素合成作用及毛囊外根鞘無色素性黑素細(xì)胞激活和移行的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

6 王大光;人毛囊外毛根鞘無色素黑素細(xì)胞的激活與移行和中藥淫羊藿苷等抑制黑素瘤細(xì)胞及黑素細(xì)胞黑素生成的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

7 劉棟;皮質(zhì)類固醇、維甲酸、積雪草甙對黑素細(xì)胞黑素合成的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

8 湯蘆艷;維生素D衍生物治療白癜風(fēng)的臨床觀察及對黑素細(xì)胞生物學(xué)作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

9 盧濤;利用組織工程技術(shù)探索同種異體黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 李強(qiáng);白癜風(fēng)相關(guān)黑素細(xì)胞膜抗原的分析及鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

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1 王翠;表沒食子兒茶素沒食子酸酯通過誘導(dǎo)抗氧化酶提高黑素細(xì)胞的抗氧化能力[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 蔣森陽;用于人體黑素細(xì)胞培養(yǎng)和移植的殼聚糖納米纖維膜的研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 朱龍飛;黃芩素改善線粒體功能、增強(qiáng)白癜風(fēng)黑素細(xì)胞抗氧化應(yīng)激能力的作用和機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

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6 蔡蘭花;基于Caspase-3、Bcl-2、Bax的阿魏酸對表皮黑素細(xì)胞抗氧化保護(hù)效應(yīng)及凋亡的影響[D];暨南大學(xué);2015年

7 倪靜;代謝型谷氨酸受體6在黑素細(xì)胞形態(tài)及黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張園園;黑素細(xì)胞胞吐方式的直觀證據(jù)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 胡文治;熱處理在UVB誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞損傷中的作用及其分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

10 楊紅;人表皮黑素細(xì)胞體外培養(yǎng)及過氧化氫對黑素細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2006年

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本文編號：921197