本文關(guān)鍵詞：熊果酸對(duì)干擾素γ刺激HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素33的影響

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【摘要】：背景銀屑病是一個(gè)免疫細(xì)胞大量浸潤的慢性炎癥性皮膚疾病。免疫系統(tǒng)在其發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。最近IL-23,TNF,IL-17等抗細(xì)胞因子治療的成功,提示細(xì)胞因子作為細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)蛋白,在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。IL-33,一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子,為探索銀屑病的發(fā)病機(jī)制提供了新的前景。熊果酸作為一個(gè)具有抗炎作用的天然產(chǎn)物,其對(duì)IL-6、IFN-γ等炎性細(xì)胞因子的表達(dá)以及可能在炎癥通路中的作用已經(jīng)被報(bào)道。然而它在銀屑病中對(duì)IL-33分泌的影響尚未報(bào)道。那么進(jìn)一步探索熊果酸在銀屑病中的抗炎效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制是非常必要的。目的探討熊果酸對(duì)干擾素γ(IFN-γ)刺激HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素33(IL-33)的影響及其機(jī)制。方法不同濃度熊果酸(0、0.1、1、5、10、20、40、80μmol/L)分別刺激HaCaT細(xì)胞24、48、72 h,MTT法檢測其對(duì)細(xì)胞增殖的影響。將HaCaT細(xì)胞與IFN-γ共培養(yǎng)建成炎性細(xì)胞模型,再選取一定濃度熊果酸(10和15μmol/L)共培養(yǎng),以IFN-γ誘導(dǎo)的HaCaT炎性細(xì)胞模型為對(duì)照,探討熊果酸的抗炎作用,RT-PCR法檢測IL-6和IL-33 m RNA的表達(dá),Western印跡法檢測IL-33、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)MTT法檢測顯示,5~20μmol/L熊果酸作用24 h對(duì)細(xì)胞活力影響不大,而40~80μmol/L熊果酸在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均可明顯抑制HaCaT細(xì)胞增殖(P0.05),為排除藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響,后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用10和15μmol/L濃度。(2)HaCaT細(xì)胞經(jīng)200μg/L IFN-γ刺激后,IL-33 m RNA(0.812±0.036)、IL-6m RNA(0.947±0.091)表達(dá)量和IL-33蛋白表達(dá)(1.317±0.119)均顯著高于空白對(duì)照組(分別為0.412±0.021、0.595±0.030和0.147±0.036,均P0.05);而IFN-γ+10μmol/L熊果酸組(分別為0.447±0.042、0.437±0.099和0.923±0.058)和IFN-γ+15μmol/L熊果酸組(分別為0.438±0.028、0.350±0.075和0.564±0.113)又較IFN-γ組(分別為0.812±0.036、0.947±0.091和1.317±0.119)顯著降低(均P0.05),且這兩組IL-33 m RNA水平與空白對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而IFN-γ+15μmol/L熊果酸組IL-33蛋白水平較IFN-γ+10μmol/L熊果酸組更低(P0.05)。(3)HaCaT細(xì)胞分別經(jīng)IFN-γ刺激5、60 min后,p-ERK1/2蛋白表達(dá)均明顯高于空白對(duì)照組。在此炎性細(xì)胞模型基礎(chǔ)上加入15μmol/L熊果酸分別干預(yù)5 min、60min,IFN-γ+15μmol/L熊果酸5 min組和IFN-γ+15μmol/L熊果酸60 min組p-ERK1/2蛋白的相對(duì)表達(dá)量(0.458±0.053、0.302±0.054)分別低于IFN-γ5 min組(0.941±0.042)和60 min組(0.509±0.032),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而總ERK1/2蛋白表達(dá)量不變。結(jié)論(1)熊果酸對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響具有時(shí)間、濃度依賴性;(2)熊果酸能夠降低IFN-γ刺激的HaCaT細(xì)胞IL-33的表達(dá),具有抗炎活性;(3)熊果酸的抗炎作用可能與調(diào)節(jié)ERK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：熊果酸 IFN-γ 白細(xì)胞介素1 白細(xì)胞介素6 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)MAP激酶類 HaCaT細(xì)胞 白細(xì)胞介素33
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 1 實(shí)驗(yàn)材料12-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 3 結(jié)果19-22
• 4 討論22-26
• 5 小結(jié)26-27
• 附圖27-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述：熊果酸在炎癥性疾病中的作用以及銀屑病的免疫學(xué)研究進(jìn)展34-55
• 參考文獻(xiàn)46-55
• 附錄55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡歷58

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