本文關(guān)鍵詞：上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在銀屑病中的研究

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【摘要】：研究背景上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是一種胚胎時(shí)期出現(xiàn)過(guò)的一個(gè)基本過(guò)程,同時(shí)也是傷口愈合、器官纖維化以及惡性上皮腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)。研究EMT對(duì)于認(rèn)識(shí)和理解炎癥性疾病發(fā)生、發(fā)展的病理生理機(jī)制都有十分重要的意義。銀屑病是以表皮過(guò)度增殖、血管內(nèi)皮異常增生和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的慢性炎癥性皮膚病。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在增殖和遷移中表型轉(zhuǎn)變,其抗凋亡、遷移能力顯著提升,這個(gè)過(guò)程類似于上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的過(guò)程,為了進(jìn)一步證實(shí)猜想,我們開(kāi)展了這個(gè)課題的研究。目的明確EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及皮膚組織中的定位；明確EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在正常皮膚組織及體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)量；闡明EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病中表達(dá)的相關(guān)調(diào)控因素；EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。方法獲取來(lái)自銀屑病病人皮膚樣本,并進(jìn)行角質(zhì)形成細(xì)胞原代培養(yǎng)。免疫熒光及免疫組化法研究EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病皮膚組織及細(xì)胞的定位。提取組織及細(xì)胞的RNA和蛋白質(zhì),進(jìn)行定量PCR、免疫印跡實(shí)驗(yàn),分析EMT相關(guān)分子標(biāo)志物的表達(dá)量。經(jīng)銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子處理,進(jìn)一步觀察EMT相關(guān)分子標(biāo)志物不同細(xì)胞因子處理下在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)差異。經(jīng)ERK、Rho和GSK3的抑制劑分別處理以及與地塞米松聯(lián)合處理,以此觀察EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。結(jié)果正常皮膚及銀屑病皮膚樣本中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的表達(dá)1.上皮細(xì)胞分子標(biāo)記物E-cad和β-catenin在正常表皮和銀屑病表皮全層中均有表達(dá)；K10和K16定位于表皮層棘層以上,正常和銀屑病表皮中定位無(wú)明顯差異。K14在正常表皮中定位于基底及基底上層,而在銀屑病表皮中則定位于表皮全層。2.在正常和銀屑病真皮中均沒(méi)有上皮分子標(biāo)志物E-cad,K10,K14和K16的表達(dá)。3.在正常表皮中沒(méi)有間質(zhì)分子標(biāo)志物Vim, Snail, Slug, FN和N-cad的表達(dá)。4.在銀屑病表皮中,間質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)志物Vim, Snail, Slug和FN大量表達(dá),N-cad中等量表達(dá)。1.體外培養(yǎng)正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物RNA和蛋白水平1.與正常角質(zhì)形成細(xì)胞相比,銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物轉(zhuǎn)錄組測(cè)序水平為K10下調(diào),Vim,FN,PAI-1和Snail RNA水平上調(diào),E-cad,K14, K16,N-cad,β-catenin和Slug沒(méi)有明顯差異。2.正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中,Vim, FN和PAI-1 mRNA水平有顯著差異(P0.01),而E-cad,K10,K14,K16,N-cad,β-catenin,Snail和Slug mRNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中,Vim,FN和PAI-1蛋白水平有顯著差異。2.銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的調(diào)控機(jī)制1.上皮分子標(biāo)志物E-cad在TNF-a作用下表達(dá)略微升高,K10在IL-8,TGF-β1,IL-13,尤其是IL-17A和TNF-α的作用下表達(dá)顯著下調(diào)。K14在IL-17A的作用下表達(dá)降低而TGF-β1對(duì)其作用相反,TGF-β1也使N-cad表達(dá)顯著上調(diào)。2.IL-17A和IL-13下調(diào)間質(zhì)分子標(biāo)志物Vim和FN mRNA水平,而TGF-β1則作用相反。3.TNF-α上調(diào)FN而下調(diào)Slug的表達(dá),TGF-β1上調(diào)PAI-1,Snail在IL-17A作用下表達(dá)上調(diào),而IL-8則促其下調(diào)。4.MAPK/ERK、Rho/ROCK和Wnt/GSK3信號(hào)通路在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞EMT的作用1.Y27632阻斷Rho,或SB216763阻斷GSK3后均能引起E-cad,β-catenin和Slug RNA和蛋白水平的升高。2.單獨(dú)使用地塞米松在0.2gM濃度時(shí)可使Slug下調(diào)而對(duì)E-cad和P-catenin無(wú)影響,在2μM濃度時(shí)引起E-cad表達(dá)升高和Slug的表達(dá)降低。3.地塞米松在0.2μM的濃度與Y27632共孵育時(shí)能明顯抑制Y27632所引起的E-cad,β-catenin和Slug表達(dá)上調(diào),但在其2μM濃度時(shí)只影響Y27632對(duì)β-catenin的影響。4.SB216763介導(dǎo)的E-cad過(guò)表達(dá)在地塞米松0.2μM和2μM濃度時(shí)均被抑制,而對(duì)β-catenin和Slug的影響則只有在地塞米松2gM濃度時(shí)則被抑制。結(jié)論1.表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的特征是上調(diào)間充質(zhì)分子標(biāo)志物Vim,FN和PAI-1,而上皮分子標(biāo)志物E-cad,K10和K14并無(wú)明顯變化。2.在銀屑病EMT中,IL-17A和LI-13是負(fù)性調(diào)節(jié)因子,TGF-β1則是正性調(diào)節(jié)因子,TNF-a的作用多向性。3.ERK,Rho和GSK3信號(hào)通道參與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞EMT過(guò)程,而地塞米松起保護(hù)作用。4.銀屑病屬于EMT的2型中間表型。
【關(guān)鍵詞】：上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 銀屑病 E-cadherin Vimentin 角質(zhì)形成細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 本課題中使用到的主要儀器14-15
• 主要試劑的配制15-18
• 英文縮寫注釋18-22
• 1 前言22-25
• 2 材料與方法25-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料25
• 2.2 標(biāo)本收集25-26
• 2.3 表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)原代培養(yǎng)26
• 2.4 RNA提取,逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR26-27
• 2.5 免疫熒光法27-28
• 2.6 免疫組化法28
• 2.7 免疫印跡(western blot)28-32
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 3 結(jié)果33-46
• 3.1 正常皮膚及銀屑病皮膚樣本中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的表達(dá)33-36
• 3.2 體外培養(yǎng)正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物RNA和蛋白水平36-38
• 3.3 銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的調(diào)控機(jī)制38-41
• 3.4 MAPK/ERK、Rho/ROCK和Wnt/GSK3信號(hào)通路在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞EMT的作用41-46
• 4. 討論46-49
• 5 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-58
• 綜述58-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68

【相似文獻(xiàn)】

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