本文關(guān)鍵詞：Gasdermin A3基因在小鼠皮膚上皮中對Krt6b和Frizzled4表達(dá)影響的實驗研究

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【摘要】：研究背景:皮膚是由表皮,真皮組成。皮膚與其附屬器官(如毛囊、皮脂腺和汗腺)一起起到保護(hù)機體免受外界損傷、維持機體內(nèi)環(huán)境平衡以及維持體溫的作用。毛囊是皮膚的附屬器官之一,毛囊形態(tài)建成開始于胚胎期12.5天(E12.5),待小鼠出生后,毛囊會經(jīng)歷生長期(anagen),退化期(catagen)和靜止期(telogen)的周期性循環(huán)。多種信號通路及各種因子尤其是分化相關(guān)因子參與毛囊周期的調(diào)控,任何環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均會影響毛囊周期的正常循環(huán)。角質(zhì)蛋白是重要的蛋白家族,它是皮膚,毛發(fā),指甲的重要組成成分。Krt6b蛋白是角蛋白家族中的一員,屬于二型角蛋白,該蛋白是哺乳動物表皮角質(zhì)形成細(xì)胞成熟分化過程中十分重要的分子,參與角質(zhì)形成層的形成,對小鼠及其他哺乳動物皮膚及內(nèi)部器官起到保護(hù)作用。Gsdermin A3(Gsdma3)是GSDM家族成員之一,位于小鼠第11號染色體,該基因突變后小鼠表皮增厚,毛囊發(fā)育異常。成年鼠表皮發(fā)現(xiàn)顆粒狀棘突,毛發(fā)脫落,皮色發(fā)灰白色。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)Gsdma3基因突變鼠表皮細(xì)胞數(shù)量增多,表皮增厚,角質(zhì)層增厚明顯以及毛囊靜止期延長等特點。這些都與角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖分化相關(guān)。提示Gsdma3基因可能與Krt6b有著相關(guān)關(guān)系。Wnt/β-catenin信號通路對皮膚上皮細(xì)胞的增殖分化起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用,我們之前的研究發(fā)現(xiàn)Gsdma3基因突變后,Wnt/β-catenin信號通路核心分子β-catenin表達(dá)量升高,提示Gsdma3基因與Wnt/β-catenin信號通路有著相關(guān)關(guān)系。Frizzled4是Wnt/β-catenin信號通路的受體之一,有報道指出,Frizzled4在毛囊周期進(jìn)程中的表達(dá)具有時空異性,可能參與了毛囊周期的調(diào)節(jié)。除此之外,曾有報道指出,Krt6b受到Wnt/β-catenin信號通路Frizzled的調(diào)節(jié),因此Gsdma3基因可能通過Frizzled4相關(guān)的Wnt/β-catenin信號通路來調(diào)節(jié)Krt6b的表達(dá)。研究目的:1.通過分析Gsdma3基因突變和過表達(dá)時,小鼠背部皮膚上皮細(xì)胞中Krt6b和Frizzled4表達(dá)的情況,探明Gsdma3基因?qū)π∈笃つw上皮細(xì)胞中Krt6b和Frizzled4表達(dá)的影響。2.通過抑制小鼠背皮皮膚中的Wnt/β-catenin信號通路觀察Krt6b的表達(dá)情況,對Gsdma3基因調(diào)控Krt6b基因表達(dá)的機制加以初步探討。研究方法:1、Gsdma3基因?qū)rt6b表達(dá)影響的研究通過利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突變鼠(AE鼠)及Gsdma3基因表達(dá)病毒等材料,應(yīng)用病毒感染、免疫熒光、RT-PCR、Q-PCR、WB等實驗技術(shù)方法,在野生型鼠(WT鼠)和Gsdma3基因突變鼠(AE鼠)對比實驗、Gsdma3基因突變鼠(AE鼠)回補實驗及野生型鼠(WT鼠)過表達(dá)實驗,分析在體小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因?qū)rt6b表達(dá)影響的情況,從而分析Gsdma3與Krt6b的相關(guān)關(guān)系。2、Gsdma3基因?qū)rizzled4表達(dá)影響的研究通過利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突變鼠(AE鼠),體外培養(yǎng)小鼠皮膚上皮細(xì)胞(JB6細(xì)胞)及Gsdma3基因表達(dá)病毒等材料,應(yīng)用病毒感染、免疫熒光、RT-PCR、Q-PCR、WB等實驗技術(shù)方法,從在體水和離體水平分別分析Gsdma3基因?qū)rizzled4表達(dá)情況的影響,同時得出Gsdma3基因與Frizzled4的相關(guān)關(guān)系。3、Gsdma3調(diào)節(jié)Krt6b機制的初步探明通過利用野生型鼠(WT小鼠),Gsdma3基因突變鼠(AE鼠)及Gsdma3基因表達(dá)病毒等材料,借助病毒感染、免疫熒光、Q-PCR、WB等實驗技術(shù)方法,從在體水平上通過Gsdma3基因回補和過表達(dá)實驗以及Gsdma3基因突變鼠(AE)Wnt/β-catenin信號通路抑制劑注射實驗,分析Krt6b和Frizzled4表達(dá)的變化,從而初步探明Gsdma3調(diào)節(jié)Krt6b的機制。結(jié)果:1、從野生型鼠和Gsdma3基因突變鼠毛囊周期各個時相點出發(fā),利用免疫熒光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技術(shù)手段,其結(jié)果顯示,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細(xì)胞中Krt6b的表達(dá)上調(diào);Gsdma3基因突變鼠回補實驗,通過免疫熒光實驗手段檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),Krt6b的表達(dá)下調(diào);野生型鼠拔毛模型過表達(dá)Gsdma3基因,利用免疫熒光實驗手段檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),Krt6b的表達(dá)也下調(diào)。2、從野生型鼠和Gsdma3基因突變鼠毛囊周期各個時相點出發(fā),采用免疫熒光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技術(shù)手段,檢測結(jié)果表明,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細(xì)胞中Frizzled4的表達(dá)上調(diào);利用培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞過表達(dá)Gsdma3基因,通過免疫熒光、RT-PCR、Q-PCR及WB的技術(shù)手段,檢測Frizzled4表達(dá)情況,其結(jié)果顯示,Gsdma3基因過表達(dá)后,Frizzled4表達(dá)下調(diào)。3、在Gsdma3基因突變鼠回補實驗及野生型鼠拔毛模型Gsdma3過表達(dá)實驗中,利用RT-PCR、Q-PCR及WB的技術(shù)手段檢測Krt6b和Frizzled4表達(dá)情況,其結(jié)果顯示Frizzled4和Krt6b的表達(dá)量均發(fā)生下調(diào)。Gsdma3基因突變鼠背部皮膚注射Wnt/β-catenin信號通路抑制劑,利用免疫熒光手段檢測,其結(jié)果顯示Frizzled4和Krt6b的表達(dá)量均下調(diào)。結(jié)論:1、在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因可以抑制Krt6b基因的表達(dá)。2、在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因可以抑制Frizzled4基因的表達(dá),Frizzled4是Wnt/β-catenin信號通路的受體之一。3、在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsmda3基因可能通過抑制Frizzled4表達(dá)調(diào)控Krt6b的基因表達(dá)。4、
【關(guān)鍵詞】：Gsdma3基因 Krt6b基因 Frizzled4基因 小鼠皮膚上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R751
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 Gasdermin A3基因在小鼠皮膚上皮中對Krt6b表達(dá)影響的實驗研究13-31
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.2 實驗方法16-23
• 2.3 實驗結(jié)果23-29
• 2.4 討論29-31
• 第三章 Gasdermin A3基因在小鼠皮膚上皮中對Frizzled4表達(dá)影響的實驗研究31-53
• 3.1 實驗材料31-34
• 3.2 實驗方法34-44
• 3.3 實驗結(jié)果44-51
• 3.4 討論51-53
• 第四章 Gsdermin A3基因調(diào)控Krt6b基因表達(dá)的分子機制的初步探索53-70
• 4.1 實驗材料53-56
• 4.2 實驗方法56-63
• 4.3 實驗結(jié)果63-68
• 4.4 討論68-70
• 全文總結(jié)70-71
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 文獻(xiàn)綜述 皮膚干細(xì)胞的分化標(biāo)記因子及其影響機制74-87
• 參考文獻(xiàn)83-87
• 在讀期間發(fā)表文章87-88
• 致謝88

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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7 陳l，

本文編號：808759