本文關(guān)鍵詞：靶向eEF-2K對(duì)黑色素瘤細(xì)胞Vemurafenib治療敏感性的影響及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： eEF-2K Vemurafenib NH125 黑色素瘤 survivin

【摘要】：目的:研究真核延伸因子激酶2(eEF-2K)對(duì)黑色素瘤細(xì)胞存活和增殖能力的影響及靶向eEF-2K對(duì)Vemurafenib治療敏感性的研究。方法:采用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和藥理學(xué)等多種方法檢測1)eEF-2K對(duì)黑色素瘤細(xì)胞存活、增殖能力的影響;2)靶向eEF-2K對(duì)黑色素瘤細(xì)胞Vemurafenib治療敏感性的作用及機(jī)制研究;3)eEF-2K抑制劑NH125與Vemurafenib協(xié)同治療研究。結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn):1)eEF-2K在BRAF V600E突變的黑色素瘤細(xì)胞呈高表達(dá)。MTT和克隆集落實(shí)驗(yàn)表明:eEF-2K可促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞存活、增殖,沉默eEF-2K或NH125處理(eEF-2K的特異性抑制劑)后,黑色素瘤細(xì)胞存活和增殖能力明顯下降;2)靶向eEF-2K可促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞對(duì)Vemurafenib治療敏感性。用Vemurafenibe分別治療黑色素瘤Vemurafenibe敏感株和耐藥株細(xì)胞,蛋白印跡實(shí)驗(yàn)表明,Vemurafenib可以明顯下調(diào)敏感株細(xì)胞eEF-2K的活性,而耐藥株細(xì)胞卻沒有明顯變化;沉默eEF-2K或用NH125處理后,Vemurafenib可明顯抑制黑色素瘤細(xì)胞存活和增殖,并可促進(jìn)凋亡蛋白cleaved PARP表達(dá)明顯增加;COMPUSYN軟件分析NH125與Vemurafenib聯(lián)合使用具有協(xié)同作用,協(xié)同指數(shù)CI1;3)NH125與Vemurafenib協(xié)同誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞凋亡主要通過調(diào)控抗凋亡蛋白survivin的表達(dá)而實(shí)現(xiàn),表現(xiàn)為兩者合用后,survivin表達(dá)明顯下調(diào),過表達(dá)survivin后,凋亡水平得到部分抑制。結(jié)論:靶向eEF-2K可促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞對(duì)Vemurafenib治療敏感性,NH125與Vemurafenib具有協(xié)同作用,具體機(jī)制主要是通過調(diào)控抗凋亡蛋白survivin的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。我們的研究結(jié)果表明,eEF-2K可以作為一個(gè)新的潛在的治療黑色素瘤的靶點(diǎn),同時(shí)這兩種藥物的組合使用有可能被用作新的逆轉(zhuǎn)黑色素瘤BRAF抑制劑治療耐藥的新策略。
【關(guān)鍵詞】：eEF-2K Vemurafenib NH125 黑色素瘤 survivin
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 研究背景8-13
• 1.黑色素瘤簡介8
• 2.黑色素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制8-10
• 3. BRAF抑制劑vemurafenib治療黑色素瘤的研究進(jìn)展及耐藥性問題10-11
• 4.真核延伸因子2激酶（eEF-2K）與腫瘤相關(guān)性11-13
• 材料與方法13-24
• 一、實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 1. 細(xì)胞株13
• 2. 主要試劑13-14
• 3. 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 4.溶液配制15-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-24
• 1. 細(xì)胞培養(yǎng)16
• 2.siRNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染16-17
• 3.ATP含量測定17-18
• 4.細(xì)胞增殖能力檢測18
• 5. 細(xì)胞凋亡檢測：18
• 6. Western Blot法檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)18-20
• 7. 質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)20-22
• 8. 細(xì)胞活力檢測22
• 9. 細(xì)胞克隆集落形成實(shí)驗(yàn)22-23
• 10. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-38
• 1. eEF-2K影響黑色素瘤細(xì)胞的存活和增殖。24-29
• 2. BRAF抑制劑Vemurafenib可抑制敏感黑色素瘤細(xì)胞eEF-2K的活性。29-31
• 3. eEF-2K參與黑色素瘤細(xì)胞對(duì)BRAF抑制劑Vemurafenib治療抵抗，同時(shí)NH125與Vemurafenib合用具有協(xié)同作用。31
• 4. 干擾eEF2K或NH125配合Vemurafenib可以明顯誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞凋亡。 .. 2431-35
• 5. Vemurafenib與NH125聯(lián)合使用, 可以協(xié)同抑制黑色素瘤細(xì)胞生長、存活主要是通過下調(diào)抗凋亡蛋白survivin的表達(dá)水平，促進(jìn)凋亡。35-38
• 討論38-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 綜述48-74
• 參考文獻(xiàn)60-74
• 英文縮略詞表74-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文75-76
• 致謝76-77

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