本文關(guān)鍵詞：耐阿奇霉素與頭孢曲松低敏淋病奈瑟菌的耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究

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【摘要】：第一部分 南京地區(qū)淋球菌抗生素耐藥情況分析目的：監(jiān)測(cè)南京地區(qū)淋球菌對(duì)抗生素的敏感性,分析2013至2014年度淋球菌耐藥情況。方法：連續(xù)招募2013-2014年間就診于南京性病門(mén)診具有急性尿道炎癥狀的男性患者,并進(jìn)行淋球菌分離培養(yǎng)。對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性的384株淋球菌以瓊脂稀釋法測(cè)定青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、大觀霉素、頭孢克肟、頭孢曲松及阿奇霉素對(duì)淋球菌的最小抑菌濃度(MIC)。采用酸度紙片法測(cè)定產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG),以多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法對(duì)PPNG和四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG)所攜帶的耐藥質(zhì)粒進(jìn)行分型,并對(duì)PPNG菌株進(jìn)行blaTEM基因檢測(cè)。結(jié)果：本研究中淋球菌對(duì)抗生素耐藥率依次為環(huán)丙沙星100%(384/384)、四環(huán)素85.9%(330/384)、青霉素72.1%(277/384)、阿奇霉素32.3%(124/384)。阿奇霉素高度耐藥菌株比例為10.4%(40/384),頭孢曲松低敏菌株比例為9.9%(38/384)。未發(fā)現(xiàn)大觀霉素、頭孢克肟和頭孢曲松耐藥株。在全部菌株中,PPNG占46.9%(180/384),TRNG比例為34.6%(133/384)。PPNG主要攜帶亞洲型質(zhì)粒(73.3%,132/180),非洲型質(zhì)粒比例(26.7%,48/180)較2011-2012年度(10.0%,12/120)呈顯著性上升(X2=12.500,P0.001)。TRNG的主要質(zhì)粒型別為荷蘭型(91.7%,122/133)。41.1%(74/180)的PPNG中含有blaTEM-135基因。結(jié)論：頭孢曲松和大觀霉素仍可作為本地區(qū)淋球菌治療的一線用藥,但頭孢曲松低敏株的增多、大觀霉素MIC呈上升趨勢(shì)均提示應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)淋球菌耐藥性監(jiān)測(cè)。阿奇霉素高度耐藥淋球菌在南京地區(qū)出現(xiàn),且占有較高比例,提示本地區(qū)不宜推薦頭孢曲松和阿奇霉素聯(lián)合治療淋球菌感染。南京地區(qū)淋球菌質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥比例和TRNG質(zhì)粒型別分布與上一年度相比無(wú)顯著變化,但攜帶非洲型質(zhì)粒PPNG的比例上升提示可能存在菌株間的跨洲際交流。本地區(qū)PPNG中blaTEM-135基因以高比例存在。第二部分 耐阿奇霉素淋球菌的耐藥機(jī)制和分子流行病學(xué)研究目的：了解南京地區(qū)阿奇霉素耐藥淋球菌菌株的耐藥相關(guān)基因突變情況、基因型別及菌株間的進(jìn)化關(guān)系。方法：對(duì)124株阿奇霉素耐藥菌株進(jìn)行耐藥相關(guān)基因(23S rRNA、mtrR、rplD、rplV)檢測(cè),并比較耐藥基因突變?cè)谥卸饶退幗M(MIC 1～64 mg/L)和高度耐藥組(MIC≥256mg/L)間的差異。以淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)方法確立菌株的序列型(ST),并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果：所有阿奇霉素高度耐藥菌株均出現(xiàn)23 S rRNA基因4個(gè)等位基因的A2143G突變,中度耐藥組中59.5%(50/84)出現(xiàn)該基因4個(gè)等位基因的C2599T突變,兩組間比較均有顯著性差異。mtrR編碼區(qū)G45D替換突變?cè)诟叨饶退幗M比例分別為70.0%(28/40),與中度耐藥組(13.1%,11/84)相比有顯著性差異(x2=40.698,P0.001)；H105Y突變?cè)诟叨饶退幗M和中度耐藥組的比例分別為22.5%(9/40)和71.4%(60/84),兩組間有顯著性差異(x2=26.283,P0.001)。所有菌株均未檢出rplD和rp1V突變。124株阿奇霉素耐藥菌株共鑒定出71個(gè)不同的STs,其中28個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的STs；高度耐藥組中45.0%(18/40)的序列型為ST1866。經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析未發(fā)現(xiàn)阿奇霉素耐藥與頭孢曲松低敏菌株同源進(jìn)化現(xiàn)象。結(jié)論：23S rRNA基因V區(qū)的特定位點(diǎn)等位基因突變?cè)诎⑵婷顾啬退幹邪l(fā)揮重要作用,A2143G和C2599T突變分別與阿奇霉素高度和中度耐藥相關(guān)。mtrR編碼區(qū)G45D替換突變可能參與阿奇霉素高度耐藥,而H105Y替換突變可能與中度耐藥有關(guān)。南京地區(qū)的阿奇霉素耐藥菌株具有遺傳背景的多樣性。ST1866是本地區(qū)與阿奇霉素高度耐藥相關(guān)的優(yōu)勢(shì)基因型。第三部分頭孢曲松低敏淋球菌的耐藥機(jī)制和分子流行病學(xué)研究目的：了解南京地區(qū)頭孢曲松低敏淋球菌菌株的耐藥相關(guān)基因突變情況、基因型別及菌株間的進(jìn)化關(guān)系。方法：對(duì)38株頭孢曲松低敏株(MIC 0.125mg/L)進(jìn)行5個(gè)耐藥相關(guān)基因(penA、mtrR、 porB、ponA和pilQ)檢測(cè),并將20株頭孢曲松敏感株(MIC≤0.002-0.015mg/L)設(shè)為對(duì)照組。以NG-MAST方法確立菌株的ST,并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果：本研究共檢測(cè)出11種非鑲嵌狀PBP2類型,并發(fā)現(xiàn)一種新的類型XLⅡ；未檢出鑲嵌狀模式。頭孢曲松低敏組PBP2主要類型為ⅩⅧ (n=17)和ⅩⅢ(n=16)。頭孢曲松低敏組100%發(fā)生A501位點(diǎn)(A501V/T)突變,而頭孢曲松敏感組20.0%(4/20)出現(xiàn)該位點(diǎn)突變,兩組間比較有顯著性差異(x2=41.981,P0.001)。mtrR啟動(dòng)子區(qū)A缺失與編碼區(qū)H105Y聯(lián)合突變率在頭孢曲松低敏組和敏感組分別為63.2%(24/38)和30.0%(6/20),兩組間比較有顯著性差異(x2=5.770,P=0.016)。mtrR編碼區(qū)其他替換(A39T、G45D)、porB1b及ponA (L421P)突變率在兩組間未見(jiàn)顯著性差異。所有菌株均未檢出pilQ突變。經(jīng)NG-MAST分型和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析,頭孢曲松低敏菌株間未出現(xiàn)克隆傳播現(xiàn)象。結(jié)論：特定的非鑲嵌狀penA突變模式(特別是PBP2氨基酸A501位點(diǎn)突變)可能在介導(dǎo)本地區(qū)淋球菌對(duì)頭孢曲松低敏中發(fā)揮重要作用。mtrR基因啟動(dòng)子區(qū)單堿基(A)缺失和編碼區(qū)H105Y替換突變可能參與了頭孢曲松敏感性下降。
【關(guān)鍵詞】：淋病奈瑟菌 抗生素耐藥性 阿奇霉素 頭孢曲松 耐藥基因 分子流行病學(xué)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R759.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表8-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-21
• 參考文獻(xiàn)16-21
• 第一部分 南京地區(qū)淋球菌抗生素耐藥情況分析21-46
• 第一節(jié) 南京地區(qū)2013至2014年度淋球菌耐藥情況監(jiān)測(cè)21-32
• 摘要21
• 研究背景與研究目的21-22
• 材料與方法22-27
• 結(jié)果27-30
• 討論30-32
• 第二節(jié) 產(chǎn)青霉素酶淋球菌、四環(huán)素高度耐藥淋球菌的質(zhì)粒分型及bla_(TEM)基因檢測(cè)32-41
• 摘要32
• 研究背景與研究目的32-33
• 材料與方法33-38
• 結(jié)果38-40
• 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 第二部分 耐阿奇霉素淋球菌的耐藥機(jī)制和分子流行病學(xué)研究46-68
• 摘要46
• 研究背景與研究目的46-47
• 材料與方法47-52
• 結(jié)果52-62
• 討論62-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 第三部分 頭孢曲松低敏淋球菌的耐藥機(jī)制和分子流行病學(xué)研究68-86
• 摘要68
• 研究背景與研究目的68-69
• 材料與方法69-72
• 結(jié)果72-80
• 討論80-82
• 參考文獻(xiàn)82-86
• 全文小結(jié)86-87
• 綜述一 淋球菌對(duì)阿奇霉素的耐藥現(xiàn)狀及耐藥機(jī)制87-95
• 參考文獻(xiàn)91-95
• 綜述二 惡性梅毒的診斷和治療95-100
• 參考文獻(xiàn)98-100
• 在讀期間發(fā)表文章100
• 參會(huì)情況100-101
• 所獲榮譽(yù)101-102
• 致謝102-103

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本文編號(hào)：792286