本文關鍵詞：pH影響申克氏孢子絲菌菌絲相向酵母相轉(zhuǎn)化實驗研究

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【摘要】：孢子絲菌病是皮膚科常見真菌病，由申克氏孢子絲菌感染所致的慢性肉芽腫性疾病，臨床上分為固定型、淋巴管型、皮膚播散型和皮膚外型。申克氏孢子絲菌為雙相型真菌，如在人體內(nèi)部寄生或在37℃條件下產(chǎn)生酵母相，而在室溫條件下則產(chǎn)生菌絲相，酵母相是孢子絲菌的致病相，申克氏孢子絲菌在體內(nèi)從菌絲相到酵母相的轉(zhuǎn)化是致病的一個關鍵步驟。酵母相可在感染者體內(nèi)增殖，形成小的芽生孢子而致病。從而引起皮膚、皮下組織、粘膜和局部淋巴系統(tǒng)甚至全身多系統(tǒng)的損害，這種雙相真菌的致病性和其雙相型的轉(zhuǎn)換密切相關。目前關于酵母相轉(zhuǎn)化的研究報道多集中在基因水平，而對于與致病性同樣緊密相關的物理生化特點研究較少，國內(nèi)學者張靜通過實驗證實溫度和培養(yǎng)基均可以影響孢子絲菌酵母相的轉(zhuǎn)化；條件致病菌白色念珠菌亦具有相似轉(zhuǎn)換，國內(nèi)學者劉澤虎通過體外誘導白念珠菌的菌絲形態(tài)、改變培養(yǎng)基的酸堿度得出結(jié)論，偏酸性環(huán)境有利于白念珠菌酵母形成，偏堿性的環(huán)境有助于菌絲的形成。偏堿性環(huán)境有利于白念珠菌致病，目前，關于酸堿度對申克氏孢子絲菌酵母相致病的影響尚未見報道，基于以上理論，本研究通過探討不同pH在申克氏孢子絲菌酵母相轉(zhuǎn)化中的作用，證實了pH是影響申克孢子絲菌酵母相轉(zhuǎn)化的因素之一，探索出孢子絲菌生長適宜pH值范圍及酵母相轉(zhuǎn)化適宜pH范圍，為孢子絲菌病的臨床及實驗研究提供一定相關資料。 目的： 1、比較不同pH培養(yǎng)條件下申克氏孢子絲菌生長情況。探討申克氏孢子絲菌生長適宜的pH范圍，以及酵母相轉(zhuǎn)化的適宜pH范圍。 2、初步探討不同pH值在申克氏孢子絲菌酵母相轉(zhuǎn)化中的作用，證實PH值是影響酵母相轉(zhuǎn)化的因素。 方法： 1、將申克氏孢子絲菌接種在pH為1-14的沙堡弱（SDA）培養(yǎng)基內(nèi)，在25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，連續(xù)觀察3周。 2、將已接種在普通SDA的培養(yǎng)基，經(jīng)25℃活化的申克氏孢子絲菌菌絲相菌落接種于pH為5、6、7、8、9的腦心浸液瓊脂(BHI)培養(yǎng)基上，37℃下培養(yǎng)，每個pH組設計20份標本，觀察菌落生長情況并計算酵母細胞轉(zhuǎn)化率。 結(jié)果： 1、申克氏孢子絲菌在pH為1-3的培養(yǎng)基不生長，在pH為4、10、11、12、13、14的培養(yǎng)基上生長欠佳，在pH為5-9的培養(yǎng)基生長較好，申克氏孢子絲菌生長適宜pH范圍為5-9，故酵母相轉(zhuǎn)化的pH范圍亦設定在生長較好的pH為5-9的培養(yǎng)基進行下一步試驗。 2、在BHI培養(yǎng)基上pH=5、pH=6和pH=7時，全部平皿均發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化，在pH=8時16個平皿發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化，而在pH=9的平皿均未發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化。在光鏡下計數(shù)不同pH培養(yǎng)基生長的申克氏孢子絲菌酵母細胞的轉(zhuǎn)化率，發(fā)現(xiàn)在pH=7和pH=6的轉(zhuǎn)化率明顯高于pH=5和pH=8的轉(zhuǎn)化率；在pH=7的平均酵母細胞轉(zhuǎn)化率可達90%，pH=5、pH=8酵母細胞轉(zhuǎn)化率最低，且差異具有統(tǒng)計學意（P＜0.001）。不同pH發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化的時間與速度均不相同，pH=5的菌落在轉(zhuǎn)種后第2天開始出現(xiàn)，在第3-4天生長迅速，在第5天以后生長緩慢；pH=6及PH=7的菌落在轉(zhuǎn)種后第三天開始出現(xiàn)，在第4-5天生長迅速，在第6天以后生長緩慢；pH=8的菌落在轉(zhuǎn)種后第5天開始出現(xiàn)，在第6-8天生長迅速，在第9天以后生長緩慢。 結(jié)論： 1、申克氏孢子絲菌在pH為5-9的培養(yǎng)基上生長良好，在4、10、11、12、13、14的培養(yǎng)基上生長欠佳，在pH為1、2、3的培養(yǎng)基上不生長，，申克氏孢子絲菌適宜生長的pH范圍為5-9。 2、PH值是影響申克氏孢子絲菌酵母相轉(zhuǎn)化的因素。pH為5-8范圍內(nèi)可發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化，pH=7時，酵母細胞轉(zhuǎn)化率最高，故PH=7為酵母相轉(zhuǎn)化最適宜pH。pH為5培養(yǎng)基較早發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化，pH為8培養(yǎng)基較晚發(fā)生酵母相轉(zhuǎn)化，二者酵母細胞轉(zhuǎn)化率均明顯低于pH=6及pH=7。
【關鍵詞】：申克氏孢子絲菌 酵母相 菌絲相 pH
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R756.6
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 第一章 引言13-15
• 第二章 綜述15-21
• 一、雙相性真菌16-18
• 二、孢子絲菌病18
• 三、致病菌結(jié)構(gòu)特點及培養(yǎng)18-19
• 四、PH 對真菌轉(zhuǎn)化致病性的影響19-20
• 五、研究與展望20-21
• 第三章 資料與方法21-28
• 3.1 實驗材料21-23
• 3.1.1 實驗菌21
• 3.1.2 儀器與設備21-22
• 3.1.3 試劑22
• 3.1.4 主要試劑制備22-23
• 3.2 方法23-24
• 3.2.1 實驗菌株活化23
• 3.2.2 培養(yǎng)基選擇23
• 3.2.3 酵母相轉(zhuǎn)化23-24
• 3.3 判定與統(tǒng)計學處理24
• 3.3.1 判定方法24
• 3.3.2 統(tǒng)計學處理24
• 3.4 結(jié)果24-28
• 第四章 討論28-31
• 第五章 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-36
• 附圖36-43
• 作者簡介及在攻讀碩士期間取得的科研成果43-44
• 致謝44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：791161