本文關(guān)鍵詞：MiR-146a-Smad4在長(zhǎng)波紫外線誘導(dǎo)人成纖維細(xì)胞光老化中作用機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:探討長(zhǎng)波紫外線(UVA)誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)光老化中miR-146a的表達(dá)情況,以及上調(diào)miR-146a表達(dá)對(duì)其靶基因Smad4及細(xì)胞光老化的影響。方法:人原代皮膚成纖維細(xì)胞來自健康兒童包皮,10代以內(nèi)的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。以10 J/cm2 UVA照射成纖維細(xì)胞(UVA照射組),分別在0、3、7、14 d提取RNA,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-146a的表達(dá)量。通過慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a的表達(dá)(miR-146a過表達(dá)組),在7 d、14 d后用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,并通過實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)miR-146a表達(dá)量。正常培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞(不做任何處理)作為空白對(duì)照組,慢病毒轉(zhuǎn)染人皮膚成纖維細(xì)胞后,再用UVA照射,則為UVA照射+miR-146a過表達(dá)組。MTT法檢測(cè)空白對(duì)照組、UVA照射組、miR-146a過表達(dá)組、UVA照射+miR-146a過表達(dá)組這4組細(xì)胞增殖吸光度(A)值,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)老化相關(guān)基因p53、p16和p21 mRNA的表達(dá),Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)Smad4蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果顯示,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),UVA照射組和對(duì)照組miR-146a的表達(dá)量逐漸下降(F=213.840,P0.01);UVA照射組miR-146a的表達(dá)量較對(duì)照組出現(xiàn)下調(diào)(F=52.55,P0.01),且照射時(shí)間越長(zhǎng),下調(diào)越明顯;時(shí)間與分組之間存在交互作用(F=21.241,P0.01)。2.慢病毒轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后第7、14天,細(xì)胞內(nèi)均有較高的熒光表達(dá),同時(shí)實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后第7、14天,miR-146a過表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)miR-146a的表達(dá)較對(duì)照組顯著增高,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=42.49,P0.01)。3.析因設(shè)計(jì)的方差分析結(jié)果顯示,UVA照射對(duì)細(xì)胞增殖活性有抑制作用(F=128.033,P0.01);慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a的表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖活性也有影響(F=24.838,P0.01);UVA照射和慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a的表達(dá)有交互作用(F=28.392,P0.01)。4.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,UVA照射可上調(diào)細(xì)胞老化相關(guān)基因p21、p53、p16mRNA的表達(dá)(F=444.909、275.110、127.228,均P0.01);慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a的表達(dá)則可下調(diào)各老化相關(guān)基因mRNA的表達(dá)(F=41.141、28.178、25.932,P0.01);UVA照射與慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a的表達(dá)有交互作用(F=41.785、43.101、29.413,均P0.01)。5.Western blot結(jié)果顯示,UVA照射對(duì)細(xì)胞內(nèi)Smad4蛋白表達(dá)有促進(jìn)作用(F=133.981,P0.01);慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a表達(dá)對(duì)Smad4表達(dá)也有影響(F=22.139,P0.01);UVA照射和慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a表達(dá)有交互作用(F=20.076,P0.01)。結(jié)論:在UVA誘導(dǎo)光老化的人成纖維細(xì)胞中,miR-146a的表達(dá)受到抑制,上調(diào)其表達(dá)能夠抑制Smad4的表達(dá),起到抗細(xì)胞光老化的作用。
【關(guān)鍵詞】：miR-146a Smad4 成纖維細(xì)胞 UVA 光老化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 中英文對(duì)照縮略詞表42-43
• 研究生期間發(fā)表文章43-44
• 致謝44-45

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本文編號(hào)：761970