本文關(guān)鍵詞：尋常型銀屑病患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測及復(fù)方甘草酸苷對T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響

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【摘要】：目的通過檢測尋常型銀屑病外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的表達(dá)和復(fù)方甘草酸苷(CG)對永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞株(HaCaT)增殖活性及T細(xì)胞相關(guān)因子的影響,探討Treg在銀屑病發(fā)病過程中的作用以及CG輔助治療銀屑病的可能機(jī)制。方法第一部分:收集30例尋常型銀屑病患者外周血(實驗組),整理患者資料[包括性別、年齡、病程、皮損面積和嚴(yán)重性指數(shù)(PASI評分)、疾病活動性(穩(wěn)定期、進(jìn)展期和消退期)],同時抽取30例正常體檢人群外周血作為對照組。分別用流式細(xì)胞儀檢測兩組外周血CD4+CD25+CD127-Treg的表達(dá)及占CD4+Treg的比例,并分析其與皮損面積和嚴(yán)重程度的相關(guān)性。第二部分:采用Ficoll密度梯度離心法分離30例尋常型銀屑病患者與30例健康對照者外周血單一核細(xì)胞(PBMCs),收取上清液作用于HaCaT細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色實驗(MTT法)檢測作用前后HaCaT細(xì)胞的增殖活性;雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測上清液中白介素(IL)-2及IL-4的表達(dá),并與皮損面積和嚴(yán)重程度進(jìn)行相關(guān)性分析。第三部分:不同濃度CG分別作用HaCaT細(xì)胞[最終體積比分別為0.05、0.1、0.2(依次設(shè)定為低、中、高濃度組)],24h后應(yīng)用MTT法測定HaCaT細(xì)胞增殖活性;ELISA法檢測上清液中IL-2及IL-4的表達(dá)。結(jié)果1.實驗組CD4+CD25+CD127-/CD4+Treg隨著PASI評分的升高而降低,呈負(fù)相關(guān);不同實驗組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.實驗組PBMCs作用HaCaT細(xì)胞24h后,細(xì)胞增殖能力比對照組明顯增強(qiáng)(P0.05);進(jìn)展期與穩(wěn)定期組PBMCs中IL-2的表達(dá)水平比對照組明顯增高(P0.05),消退期組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,不同實驗組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);相對于對照組,進(jìn)展期組PBMCs中IL-4的表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。3.實驗組PBMCs培養(yǎng)上清液中IL-2水平隨著PASI評分的升高而增加,呈強(qiáng)正相關(guān)(P0.01);IL-4水平與PASI評分呈中度負(fù)相關(guān)性(P0.05)。4.隨著CG濃度的升高,對HaCaT細(xì)胞增殖活性的抑制作用明顯增強(qiáng)(P0.01);相對于對照組,中、高濃度CG組上清液中IL-2濃度明顯下降(P0.01),高濃度CG組IL-4的濃度明顯升高(P0.05),其余組IL-2、IL-4分泌水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);不同實驗組之間比較IL-2水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+Treg與疾病的嚴(yán)重程度和活動性呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)。2.尋常型銀屑病患者PBMCs可促進(jìn)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞增殖。3.尋常型銀屑病的發(fā)病可能與Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子的異常分泌有關(guān),且其分泌水平與該疾病的活動性有一定的相關(guān)性。4.CG可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-2與IL-4的分泌而抑制皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：尋常型銀屑病 單一核細(xì)胞 HaCaT 細(xì)胞 復(fù)方甘草酸苷 白介素-2 白介素-4
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略語/符號說明8-13
• 前言13
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 第一部分 尋常型銀屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg的檢測17-27
• 1.1 實驗對象及材料17-18
• 1.1.1 研究對象17
• 1.1.2 主要試劑17
• 1.1.3 主要儀器17-18
• 1.2 實驗方法18-19
• 1.2.1 Ficoll密度梯度離心法分離尋常型銀屑病外周血單一核細(xì)胞18-19
• 1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測尋常型銀屑病外周血CD4~+CD25~+CD12~7-/CD4~+Treg19
• 1.3 實驗結(jié)果19-22
• 1.3.1 30例尋常型銀屑病患者的詳細(xì)資料和數(shù)據(jù)結(jié)果19-20
• 1.3.2 正常對照組與實驗組外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg測定結(jié)果20-21
• 1.3.3 尋常型銀屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg與皮損面積及嚴(yán)重程度的相關(guān)性21-22
• 1.3.4 尋常型銀屑病外周血CD4~+CD25~+CD127~-/CD4~+Treg與病程的相關(guān)性22
• 1.4 討論22-27
• 第二部分 尋常型銀屑病外周血單一核細(xì)胞中IL-2和IL-4的表達(dá)27-39
• 2.1 實驗對象及材料27-28
• 2.1.1 研究對象27
• 2.1.2 主要試劑27
• 2.1.3 主要儀器27-28
• 2.1.4 主要液體配制28
• 2.2 實驗方法28-31
• 2.2.1 HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)與傳代28-29
• 2.2.2 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇29
• 2.2.3 HaCaT細(xì)胞生長曲線的繪制29
• 2.2.4 Ficoll密度梯度離心法分離尋常型銀屑病PBMCs29-30
• 2.2.5 MTT法檢測尋常型銀屑病PBMCs對HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響30
• 2.2.6 ELISA法檢測尋常型銀屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4 的水平30-31
• 2.3 結(jié)果31-35
• 2.3.1 正常HaCaT細(xì)胞生長曲線結(jié)果31-32
• 2.3.2 正常對照組和實驗組PBMCs作用HaCaT細(xì)胞后的培養(yǎng)結(jié)果32-33
• 2.3.3 尋常型銀屑病PBMCs上清液對HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響33
• 2.3.4 尋常型銀屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4 的水平33-34
• 2.3.5 尋常型銀屑病PBMCs上清液中IL-2、IL-4的水平與皮損面積及嚴(yán)重程度的相關(guān)性34-35
• 2.4 討論35-39
• 第三部分 CG對人角質(zhì)形成細(xì)胞IL-2和IL-4 表達(dá)的影響39-47
• 3.1 實驗材料39-40
• 3.1.1 主要試劑39
• 3.1.2 主要儀器39-40
• 3.2 實驗方法40
• 3.2.1 MTT法檢測不同濃度CG對HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響40
• 3.2.2 ELISA法檢測不同濃度CG作用HaCaT細(xì)胞IL-2、IL-4 的水平40
• 3.3 實驗結(jié)果40-42
• 3.3.1 不同濃度CG作用后HaCaT細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果40-41
• 3.3.2 不同濃度CG對HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響41-42
• 3.3.3 不同濃度CG作用HaCaT細(xì)胞上清液中IL-2、IL-4 分泌水平42
• 3.4 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況明56-57
• 綜述一 CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的作用57-64
• 綜述一參考文獻(xiàn)61-64
• 綜述二 CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在自身免疫性疾病中的作用64-76
• 綜述二參考文獻(xiàn)71-76
• 致謝76-77
• 個人簡歷77

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本文編號：705334