本文關(guān)鍵詞：西羅莫司誘導(dǎo)自噬對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞增殖和凋亡的初步影響

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【摘要】：背景 中波紫外線主要作用于表皮,角質(zhì)形成細(xì)胞是其重要的靶細(xì)胞,可引起角質(zhì)形成細(xì)胞DNA損傷、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡,從而造成皮膚光損傷。自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞的生理現(xiàn)象,可以被損傷、輻射和饑餓等應(yīng)激因素誘導(dǎo)。白噬主要功能是降解變性蛋白質(zhì)及受損細(xì)胞器,對于保持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定極為重要,可以維持細(xì)胞在不利因素下存活。研究證實自噬在細(xì)胞損傷中被激活并起到一定的細(xì)胞保護作用。研究發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞也存在自噬,并可減輕角質(zhì)形成細(xì)胞的炎癥。角質(zhì)形成細(xì)胞中也存在自噬現(xiàn)象,自噬在角質(zhì)形成細(xì)胞UVB相關(guān)光損傷的角色尚不明確,西羅莫司作為自噬的誘導(dǎo)劑是否能減輕光損傷,我們對此做了相關(guān)初步探索。 目的 觀察UVB輻照HaCaT細(xì)胞是否出現(xiàn)自噬現(xiàn)象；研究西羅莫司對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞自噬水平的影響；檢測西羅莫司對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞增殖和凋亡的初步影響。 方法 以0、25、50mJ/cm2UVB三個劑量輻照HaCaT細(xì)胞,MDC染色法觀察是否出現(xiàn)自噬體。設(shè)置6組：空白組、DMSO組、25mJ/cm2UVB組、25mJ/cm2UVB+西羅莫司組、50mJ/cm2UVB組、50mJ/cm2UVB+西羅莫司；MDC染色法觀察并比較6組細(xì)胞出現(xiàn)自噬的水平；MTT法測定6組HaCaT細(xì)胞增殖能力；使用Hoechest染色法,AnnexinV-FITC、PI熒光標(biāo)記細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測西羅莫司對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果 UVB照射HaCaT細(xì)胞后出現(xiàn)了自噬,0、25、50mJ/cm2UVB照射組自噬體陽性細(xì)胞百分率分別為1.07%±1.85%、9.37%±1.14%、16.29%±3.03%,三組間存在顯著性差異(F=37.34,P0.01)。 6組自噬體陽性細(xì)胞百分率分別為：0.56%0.79%、1.61%±2.27%、10.00%±0.47%、21.18%±3.03%、15.82%±4.13%、29.45%±1.24%,各組間均有顯著性差異(F=45.23,P0.01),且25mJ/cm2UVB+西羅莫司組、50mJ/cm2UVB+西羅莫司組的自噬水平均高于UVB組。 6組的細(xì)胞增殖抑制率分別為：0.01%±4.70%、8.40%±12.43%、9.43%±2.87%、6.22%±5.88%、12.12%±1.91%、14.17%±4.30%,組間有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.836,n=5,P0.01);25mJ/cm2、50mJ/cm2UVB照射均抑制細(xì)胞增殖,25mJ/cm2UVB照射組抑制率為9.43%士2.87%,加入西羅莫司孵育后抑制率為6.22%士5.88%,減輕了抑制效應(yīng),而在50mJ/cm2UVB照射后加入西羅莫司,卻增加了抑制率。 Hoechest染色法結(jié)果提示25mJ/cm2組、50mJ/cm2UVB組HaCaT細(xì)胞出現(xiàn)多數(shù)凋亡小體,50mJ/cm2組較25mJ/cm2組出現(xiàn)凋亡數(shù)量為多,加入西羅莫司干預(yù)后凋亡小體明顯減少。 FCM結(jié)果提示6組早期凋亡百分比(LR)分別為：2.18%±1.30%、2.33%±1.96%、8.55%±8.44%、8.36%±0.70%、11.43%±11.81%、5.18%±5.83%,6組中晚期凋亡百分比(UR)分別為：1.72%±0.33%、2.15%±1.11%、1.72%±1.84%、12.48%±5.04%、14.24%±4.10%、8.97%±6.01%,50mJ/cm2UVB+西羅莫司組早期、中晚期凋亡百分比均低于50mJ/cm2UVB組,提示西羅莫司處理能減輕50mJ/cm2UVB輻射引起的細(xì)胞凋亡。 結(jié)論 UVB輻照HaCaT細(xì)胞出現(xiàn)自噬現(xiàn)象；西羅莫司能增加UVB輻照下HaCaT細(xì)胞的自噬水平；西羅莫司誘導(dǎo)自噬可減輕25mJ/cm2UVB輻照對HaCaT細(xì)胞增殖活性的抑制,而在50mJ/cm2UVB輻照下則加重對細(xì)胞的抑制。西羅莫司誘導(dǎo)自噬可減輕50mJ/cm2UVB輻照下HaCaT細(xì)胞的凋亡數(shù)量。西羅莫司誘導(dǎo)自噬對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞光損傷有保護作用。
【關(guān)鍵詞】：HaCaT細(xì)胞 自噬 西羅莫司 UVB
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.1
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 引言13-17
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 一 UVB對HaCaT細(xì)胞自噬的影響17-23
• 材料17-18
• 方法18-19
• 結(jié)果19-20
• 討論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 二 西羅莫司對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞自噬的影響23-29
• 材料23
• 方法23-25
• 結(jié)果25-26
• 討論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 三 西羅莫司誘導(dǎo)自噬對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞增殖的影響29-36
• 材料29
• 方法29-32
• 結(jié)果32-33
• 討論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 四 西羅莫司誘導(dǎo)自噬對UVB輻照下HaCaT細(xì)胞凋亡的影響36-44
• 材料36
• 方法36-38
• 結(jié)果38-41
• 討論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 全文小結(jié)44-45
• 綜述一 角質(zhì)形成細(xì)胞中的自唆現(xiàn)象45-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述二 環(huán)磷酰胺在尋常型天皰瘡治療中的臨床應(yīng)用52-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 綜述三 中外特應(yīng)性皮炎診療指南比較59-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 附錄 英文縮略語67-68
• 在讀期間發(fā)表文章68-70
• 參加會議70-71
• 致謝71-74

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：695498