本文關(guān)鍵詞：UVB輻射對(duì)人成纖維細(xì)胞TET2基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：1.觀察UVB干預(yù)對(duì)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞增殖活力的影響。 2.觀察UBV干預(yù)對(duì)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞TET2基因表達(dá)的影響。 方法：1.取體外培養(yǎng)的原代人成纖維細(xì)胞,用不同劑量UVB照射成纖維細(xì)胞。 2.亞毒性劑量UVB累積五次照射成纖維細(xì)胞后,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)照射組及對(duì)照組細(xì)胞的增殖活力。 3.用不同累積劑量UVB照射干預(yù)各組成纖維細(xì)胞后,用real time-PCR法檢測(cè)各組成纖維細(xì)胞的羥甲基化相關(guān)基因TET2的表達(dá)情況。 4.用不同累積劑量UVB照射干預(yù)各組成纖維細(xì)胞后,用Western-Blot法檢測(cè)TET2蛋白的含量。 結(jié)果：1.用每日10mJ/cm2,累積照射劑量50mJ/cm2的UVB輻射干預(yù)體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞后,取經(jīng)干預(yù)的細(xì)胞接種培養(yǎng),同時(shí)接種未經(jīng)干預(yù)的細(xì)胞作為對(duì)照組,把細(xì)胞爬壁時(shí)間設(shè)為Oh時(shí)間點(diǎn),在0h、24h、48h、72h及96h時(shí)間點(diǎn)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,與對(duì)照組相比,在同一時(shí)間點(diǎn)經(jīng)干預(yù)的細(xì)胞吸光度明顯小于對(duì)照組,增殖活力低,在Oh時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),在24h、48h、72h、96h時(shí)間點(diǎn)差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05) 2.根據(jù)累積UVB照射劑量進(jìn)行分組,同時(shí)設(shè)未經(jīng)照射成纖維細(xì)胞為對(duì)照組。當(dāng)用每日10mJ/cm2UVB照射體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞后,隨UVB累積劑量的增加,TET2mRNA水平先升高,在第二天(累積劑量20mJ/cm2)時(shí)達(dá)到高峰,隨后TET2mRNA水平出現(xiàn)回落,但均維持在較高水平,與對(duì)照組相比,累積UVB輻射量為20mJ/cm2、30mJ/cm2、40mJ/cm2、50mJ/cm2組TET2mRNA的增加量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05), UVB輻射量為10mJ/cm2組的人成纖維細(xì)胞中TET2mRNA與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。 3.根據(jù)RT-PCR的檢測(cè)結(jié)果,選取具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的組別進(jìn)行TET2蛋白含量的檢測(cè),用Werstern-Blot法檢測(cè)對(duì)照組及UVB累積輻射量為20mJ/cm、30mJ/cm、40mJ/cm2、50mJ/cm2的處理組,隨累積照射量的增加,TET2蛋白水平先呈上升趨勢(shì),在20mJ/cm2組最大,隨后逐漸下降,UVB累積輻射量為20mJ/cm2、30mJ/cm2的處理組與對(duì)照組相比TET2蛋白表達(dá)的水平增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),UVB累積輻射量為40mJ/cm2、50mJ/cm2的處理組TET2蛋白水平較對(duì)照組增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論：1.用亞毒性劑量UVB每次10mJ/cm2,共五次干預(yù)體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖活力與對(duì)照組相比明顯降低,細(xì)胞呈現(xiàn)老化狀態(tài)。 2.用適宜劑量UVB干預(yù)體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞后,TET2表達(dá)增加,UVB照射可誘導(dǎo)TET2基因的表達(dá),去甲基化作用為光老化發(fā)生的機(jī)制之一。圖11幅,表3個(gè),參考文獻(xiàn)37篇。
【關(guān)鍵詞】：UVB TET2 光老化 成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R751
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 1 前言11-14
• 2 材料和方法14-26
• 2.1 主要儀器及試劑14-17
• 2.1.1 主要儀器14
• 2.1.2 主要試劑及耗材14-15
• 2.1.3 主要相關(guān)試劑配制15-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟17-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-19
• 2.2.2 UVB照射19
• 2.2.3 MTT法檢測(cè)UVB對(duì)成纖維細(xì)胞增殖活力的影響19-20
• 2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(REAL-TIME PCR)檢測(cè)成纖維細(xì)胞TET2MRNA的表達(dá)20-23
• 2.2.5 WESTERN-BLOT檢測(cè)成纖維細(xì)胞中TET2蛋白的表達(dá)水平23-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 3 結(jié)果26-32
• 3.1 UVB對(duì)成纖維細(xì)胞形態(tài)的影響26
• 3.2 MTT法檢測(cè)UVB對(duì)成纖維細(xì)胞增殖活性的影響26-27
• 3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(REAL-TIME PCR)檢測(cè)細(xì)胞中TET2MRNA的表達(dá)情況27-30
• 3.3.1 細(xì)胞RNA樣品的質(zhì)檢27
• 3.3.2 UVB對(duì)成纖維細(xì)胞TET2基因表達(dá)時(shí)效性的影響27-30
• 3.3.3 UVB照射干預(yù)對(duì)成纖維細(xì)TET2蛋白表達(dá)的影響30
• 3.4 WESTERN-BLOT法檢測(cè)經(jīng)UVB光照處理后成纖維細(xì)胞內(nèi)TET2蛋白的水平30-32
• 4 討論32-35
• 5 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 毛澤斌，，張宗玉，吳躍南，程之華;大鼠衰老過(guò)程中腦細(xì)胞DNA與c－Ha－ras原癌基因的甲基化[J];生物化學(xué)雜志;1994年05期

本文編號(hào)：669087